论文摘要
利用基因转导技术将目的基因导入某一靶细胞,通过观察细胞生物学行为的变化来认知基因功能是目前应用最广泛、技术最成熟的基因功能研究方法。在本研究中,我们选择了自身无HMGA1蛋白表达的小鼠成纤维细胞NIH3T3为研究对象。将HMGA1基因的cDNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3.0中,在脂质体介导下将质粒pcDNA3.0-HMGA1转染进小鼠成纤维细胞NIH3T3中,经G418筛选获得阳性克隆。细胞扩增培养后,进行RT-PCR分析,检测外源HMGA1基因在NIH3T3细胞中的转录表达。在确定HMGA1基因已经成功转染到NIH3T3细胞中后,我们从以下几个方面研究HMGA1对NIH3T3细胞生物学性能的影响:通过光镜观察到HMGA1基因转染后NIH3T3细胞的分化程度和形态学都发生了改变;MTT法和流式细胞术显示转染后细胞生长增殖加快;通过软琼脂集落形成实验发现转染后的NIH3T3细胞获得了非锚定依赖性生长能力;RT-PCR方法检测到转染后的细胞免疫抑制因子VEGF mRNA和FasL mRNA的表达显著增强。通过本研究我们观察到NIH3T3细胞由于稳定转染外源HMGA1基因而获得HMGA1蛋白表达之后,细胞的生物学特性发生了一定程度的变化,表现为细胞恶性转化,并且有明显的免疫抑制因子的mRNA表达。提示HMGA1是肿瘤发生发展、转移以及诱发免疫逃逸的关键分子。本研究为进一步探索HMGA1基因的功能与作用机制提供了一定的实验依据,并为以HMGA1为靶点的肿瘤基因治疗和预后评价奠定理论基础。