论文摘要
目的：探讨黄芪提取物（CAE）抗肝癌的作用机制。方法：利用MTT方法建立小牛血清（NBS）、转化生长因子-β1（TGF-β1）体外刺激HepG2细胞增殖模型，研究CEA(5，10，20，40，80mg·L-1)五个剂量对NBS、TGF-β1诱导的HepG2细胞增殖的影响；采用免疫沉淀和Western-blot方法检测CAE对TGF-β1诱导的HepG2细胞内Smad2C磷酸化的影响；Western-blot方法检测3种MAPK抑制因子对TGF-β1诱导的Smad2C、Smad2L、Smad3C、Smad3L磷酸化的影响；采用浸润小室镜下计数细胞的方法，检测CAE(40mg·L-1)对TGF-β1诱导的HepG2细胞移行的影响。结果：1．TGF-β1(9pM·L-1)、12．5％NBS作用0．5、1h时无明显促进HepG2细胞增殖作用，但作用2，4，8，16，24h均明显促进HepG2细胞增殖，CAE(5～80 mg·L-1)呈浓度依赖型地抑制HepG2细胞增殖。2．CAE(40 mg·L-1)明显抑制TGF-β1(200 pM·L-1，12 h)诱导的HepG2细胞移行。3．TGF-β1(9 pM·L-1)作用1 h，明显促进Smad2C、Smad2L、Smad3C、Smad3L磷酸化，CAE高中低三个剂量呈浓度依赖性地抑制由TGF-β1诱导的Smad2C磷酸化。4．c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制因子(1，3，10μM·L-1)呈浓度依赖性地抑制Samd2C、Smad3L的磷酸化，JNK抑制因子(1，3，10μM·L-1)有抑制Smad3C磷酸化的趋势，对Smad2L磷酸化无明显影响；p38抑制因子(1，3，10μM·L-1)呈浓度依赖性地抑制Smad2C、Smad3L磷酸化，p38抑制因子(1，3，10μM·L-1)有抑制Smad3C磷酸化的趋势，对Smad2L磷酸化无明显影响；细胞外信号调节激酶（ERK）抑制因子(1，3，10μM·L-1)有抑制Smad2L磷酸化的趋势；对Smad2C、Smad3L、Smad3C磷酸化无明显影响。结论：1．CAE可抑制HepG2细胞增殖与移行，提示，CAE可能具有抑制肝癌细胞生长与浸润的作用；2．CAE高、中、低三个剂量可呈浓度依赖性地抑制由TGF-β1诱导的Smad2C磷酸化，提示，CAE可能经由TGF-β／Smad信号转导通路从而发挥抗肝癌的作用；3．JNK的抑制因子和p38的抑制因子明显抑制TGF-β1诱导的Smad2C、Smad3L的磷酸化，提示，TGF-β可能通过活化JNK和p38信号途径促进Smad3L磷酸化，参与了肝肿瘤形成过程。