CSISV的部分特性研究及病毒纯化和中和试验

论文摘要

鸡生长与免疫抑制综合征（暂定名,CSISV）主要引起家禽的生长和免疫抑制,这种免疫抑制会导致多种混合感染或继发感染。生长抑制引起生产性能降低,给养殖业带来严重的损失。刘兴友教授等对该病进行了较深入的研究,证明是由一种新的病毒引起的。本课题在前期研究的基础上,进一步开展了病毒的特性、纯化鉴定、中和试验等研究。1日龄罗曼、海兰蛋雏鸡、AA肉仔鸡、三黄雏鸡和樱桃谷肉雏鸭人工感染CSISV后均能发病,但蛋雏鸡、肉仔鸡、肉雏鸭在发病率、死亡率、生长抑制等方面存在一定差异。罗曼、海兰蛋雏鸡感染后鸡第5天开始出现发病,发病率高达60%,第7天开始山现死亡,第14天出现死亡高峰,死亡率达30%和30%。AA肉仔鸡感染后第2天开始出现发病,发病率高达80%,第6天开始出现死亡,第14天出现死亡高峰,死亡率50%。三黄鸡感染后第4天开始发病,第7天出现发病高峰,第6天开始出现死亡,未出现明显的死亡高峰,死亡率为23.1%。感染后所有未死亡鸡均表现出生长迟缓,20日龄后感染组体重比对照组低,罗曼蛋鸡、海兰蛋鸡、AA肉仔鸡、三黄雏鸡的生长抑制率分别为54.31%、54.56%和35.51%、37.3%。樱桃谷肉雏鸭感染后没有表现出明显的发病症状,但生长迟缓,28日龄时感染组比对照组体重减轻了52.93%。CSISV病毒能被2%甲醛完全灭活,紫外线照射20分钟能完全灭活该病毒,5%H2O2不能完灭活该病毒。CSISV对酸碱有较强的耐受性,临界值为pH2.0和pH11.5。CSISV的浮密度,为1.16～1.18。SDS-PAGE电泳表明,CSISV尿囊液与空白尿囊液相比,在约31kDa处明显多出一条带（A）,而在66.2kDa～97.4kDa之间的三条带的蛋白量比空白尿囊液多。经Western-blotting证明,A带能与CSISV抗血清发生阳性反应,说明是特异性的,此蛋白可能是具有抗原性的蛋白。对CSISV病毒进行pH3和pH10.5的酸碱处理后,感染SPF鸡胚,得到纯化的病毒。并制备了相应的抗体,同时把纯化后的病毒接种于10日龄SPF鸡胚,对比观察引起的发病状况、病毒形态,通过血清中和试验,证明纯化后获得的CSISV-pH3.0和CSISV-Ph10.5与CSISV可能为一种病毒。交叉中和试验表明,CSISV不与IBDV发生交叉中和反应,说明与IBDV不存在抗原关系。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 第一章 文献综述
• 1.禽RNA免疫抑制性病毒的特性研研究进展
• 1.1 传染性法氏囊病毒（IBDV）
• 1.2 禽呼肠孤病毒（ARV）
• 1.3 网状内皮组织增殖病毒（REV）
• 1.4 禽白血病毒（ALV）
• 2.病毒的纯化方法和中和试验方法的研究进展
• 2.1 病毒的纯化方法
• 2.2 中和试验方法
• 3.鸡生长与免疫抑制综合征（CSIS）研究进展
• 3.1 流行病学和临床症状
• 3.2 病毒的结构形态
• 3.3 病毒鉴定
• 3.4 病毒检测方法的建立
• 3.5 病毒的归类
• 引言
• 第二章 CSISV的部分特性研究
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 主要试剂配制
• 1.2.2 CSISV耐酸碱临界值测定
• 1.2.3 CSISV对紫外线和部分消毒剂的敏感性试验
• 1.2.4 CSISV的宿主特性试验
• 1.2.5 SDS-PAGE电泳试验
• 1.2.6 Western-blotting分析试验
• 1.2.7 CSISV的浮密度的测定
• 2.结果与分析
• 2.1 病毒耐受酸碱的临界值
• 2.2 对紫外线和部分消毒剂的敏感性
• 2.3 宿主特性实验结果及分析
• 2.4 SDS-PAGE电泳和Western-blotting结果
• 2.5 CSISV的浮密度
• 3.讨论
• 3.1 关于理化因子
• 3.2 关于消毒剂
• 3.3 SDS-PAGE电泳
• 3.4 关于宿主特性
• 第三章 酸碱法纯化鸡生长与免疫抑制综合症病毒
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 主要试剂配制
• 1.2.2 CSISV的纯化
• 1.2.3 抗CSISV兔血清的制备
• 1.2.4 间接ELISA法操作程序
• 1.2.5 间接ELISA的试验
• 1.2.6 CSISV-pH3.0、CSISV-pH10.5交叉中和试验
• 2.结果与分析
• 50'>2.1 CSISV-pH3.0、CSISV-pH10.5的EID₅₀
• 2.2 CSISV-pH3.0在SPF鸡胚上的生长特性
• 2.3 感染后不同组织中CSISV-PH3.0纯化病毒粒子的电镜观察结果
• 2.4 抗CSISV-pH3.0、CSISV-pH10.5、CSISV兔血清
• 2.5 间接ELISA检测结果结果
• 2.6 CSISV-pH3.0、CSISV-pH10.5之间的交叉中和试验结
• 3.讨论
• 3.1 关于透射电镜实验
• 3.2 对IGSV的酸碱纯化
• 第四章 CSISV与IBDV的交叉中和实验
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 病毒的处理
• 1.2.2 病毒的稀释
• 1.2.3 病毒的感作
• 1.2.4 交叉中和重复性实验
• 2 交叉中和试验结果
• 3.讨论
• 3.1 关于中和实验原理
• 3.2 关于中和实验方法
• 3.3 关于中和实验结果的判定及影响
• 第五章 结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 附图
• 附录
• 附表1 蛋鸡日粮配方表
• 附表2 试验鸡的正常免疫程序
• 附表3 肉鸭日粮配方表
• 附表4 试验肉鸭的正常免疫程序
• 附表5 人工感染第6天鸡粪便中CSISV与抗血清ELISA检测结果
• 附表6 人工感染第7天鸡粪便中CSISV与抗血清ELISA检测结果
• 附表7 人工感染第13天鸡粪便中CSISV与抗血清ELISA检测结果
• 附表8 人工感染第14天鸡粪便中CSISV与抗血清ELISA检测结果
• 附表9 人工感染CSISV第8天樱桃谷肉鸭排毒情况
• 附表10 人工感染CSISV第8天樱桃谷肉鸭排毒情况
• 附表11 人工感染CSISV第8天樱桃谷肉鸭排毒情况
• 附表12 人工感染CSISV第8天樱桃谷肉鸭排毒情况