pH改变对大鼠P2X4受体激活电流的调制

论文摘要

第一部分P2X4嘌呤受体异体表达模型的建立目的:将大鼠颈上神经节P2X4受体的cDNA转录成mRNA,在非洲爪蟾卵母细胞中进行表达,记录P2X4受体激活电流。方法:将克隆在pcDNA3载体上的P2X4受体的cDNA用体外转录的方法转录成mRNA,通过显微注射技术将mRNA注射到卵母细胞,在室温孵育48小时～72小时,用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞表达的受体激活电流。结果:爪蟾卵母细胞可用做P2X4嘌呤受体的异体表达模型,ATP激活的P2X4受体电流呈浓度依赖型,pyridoxal-phosphate-6-azophe-nyl-2’,4’-disulphonic acid （PPADS）和苏拉明嘌呤受体拮抗剂对P2X4受体IATP几乎无作用。结论:非洲爪蟾卵母细胞可作为P2X嘌呤受体的异体表达系统,为进一步研究嘌呤受体的功能和调制提供了有力的工具。第二部分pH改变对大鼠P2X4受体激活电流的调制。目的:探讨表达在非洲爪蟾卵母细胞上大鼠颈上神经节P2X4受体激活电流的特征及pH的调制。方法:将外源性P2X4受体的mRNA注射到非洲爪蟾卵母细胞,用双电极电压钳技术研究表达在非洲爪蟾卵母细胞上的P2X4受体激活电流。结果:实验检测到表达有P2X4受体的卵母细胞全部对ATP敏感（10-4mol/L）,该电流表现出较慢的去敏感性和浓度依赖性,具有可重复性,ATP饱和浓度为300μM,电流幅度最大达到5μA;细胞外液分别应用pH为7.4、6.3、5.8的ATP（10-4mol/L）后,电流幅值明显降低,在pH7.4、6.3时,P2X4受体激活电流的EC50分别是9.1±0.4μM和11.2±0.4μM（ANOVA,P<0.01,n=6）。结论:pH降低对表达在爪蟾卵母细胞上的大鼠颈上神经节神经元P2X4受体的激活电流具有抑制作用。第三部分P2X4受体研究进展（综述）P2X4受体已从大鼠和人脑多种组织中分离出来,是分布于大脑神经系统中最多的一种亚型。由于它在外周和神经系统的重要作用而受到重视,本文着重介绍P2X4受体的结构,分布,特性和其它物质对它的调制以及生物功能。

论文目录

• 4嘌呤受体异体表达模型的建立'>第一部分 P2X₄嘌呤受体异体表达模型的建立
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
• 1 实验材料
• 1.1 实验试剂
• 1.2 溶液配制
• 1.3 实验仪器
• 2 方法
• 4 cDNA 表达载体的构建'>2.1 P2X₄ cDNA 表达载体的构建
• 2.2 质粒cDNA 的提取纯化
• 4cDNA 质粒的洗脱'>2.2.1 P2X₄cDNA 质粒的洗脱
• 2.2.2 大肠杆菌（DH5α）的扩增
• 2.2.3 感受态细胞的制备
• 4cDNA 转化到感受态大肠杆菌中'>2.2.4 P2X₄cDNA 转化到感受态大肠杆菌中
• 4cDNA 菌落筛选'>2.2.5 P2X₄cDNA 菌落筛选
• 4cDNA 质粒提取与纯化'>2.2.6 P2X₄cDNA 质粒提取与纯化
• 2.2.7 检测cDNA 纯度与浓度
• 2.3 cDNA 的电泳和浓度的计算
• 2.3.1 电泳检测
• 2.4 cDNA 体外转录
• 2.4.1 模板cDNA 线性化
• 2.4.2 cDNA 体外转录
• 2.4.3 转录反应的终止和mRNA 的纯化
• 2.5 卵母细胞的准备
• 2.6 mRNA 的注射及在卵母细胞的表达
• 结果
• 4cDNA 纯化质粒和单酶切后的鉴定'>3.1 P2X₄cDNA 纯化质粒和单酶切后的鉴定
• 3.2 体外转录
• 4cDNA 在卵母细胞中表达'>3.3 P2X₄cDNA 在卵母细胞中表达
• 讨论
• 参考文献
• 4受体激活电流的调制'>第二部分 pH 改变对大鼠P2X₄受体激活电流的调制
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验试剂
• 1.3 溶液配制
• 1.4 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 mRNA 的准备和卵母细胞的表达
• 2.2 药物和仪器
• 2.3 电生理记录
• 2.4 数据处理
• 3 结果
• 4 受体激活电流的特征'>3.1 P2X₄受体激活电流的特征
• 3.2 pH 对ATP 激活电流的调制作用和浓度-效应关系
• 3.3 pH 对ATP 激活电流的电流-电压关系曲线的影响
• 4 讨论
• 参考文献
• 4受体研究进展（综述）'>第三部分 P2X₄受体研究进展（综述）
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 4 的基因结构'>1 P2X₄的基因结构
• 4 受体的蛋白质结构'>2 P2X₄受体的蛋白质结构
• 4 的激动剂，拮抗剂，穿透性'>3 P2X₄的激动剂，拮抗剂，穿透性
• 4受体类似物的特点：人类，大鼠，小鼠P2X₄ 受体'>4 P2X₄受体类似物的特点：人类，大鼠，小鼠P2X₄受体
• 4 受体通道的变够调制'>5 IVM 对P2X₄受体通道的变够调制
• 4 受体的调制'>6 金属，酸，乙醇对P2X₄受体的调制
• 4 受体的调制'>6.1 金属对P2X₄受体的调制
• 6.2 酸对P2X 受体的调制
• 4 受体的调制'>6.3 乙醇对P2X₄受体的调制
• 4 受体分布'>7 P2X₄受体分布
• 4 受体的生物学功能'>8 P2X₄受体的生物学功能
• 参考文献
• 致谢
• 详细摘要