中国被毛孢菌丝粉胶囊指纹图谱研究及功效成分分析

论文摘要

中国被毛孢菌丝粉胶囊为单方产品,是一类将从天然冬虫夏草中分离出的无性型真菌“中国被毛孢菌”培育的菌丝体作为原料而制成的新型保健食品,其主要成分为中国被毛孢菌丝体粉末。该胶囊作为替代天然冬虫夏草的一种保健食品,保健功效与天然冬虫夏草相当,价格只是天然冬虫夏草的三十分之一,市场需求十分旺盛。但与同为身系民众健康的已较为规范的药品市场相比,目前保健食品市场管理较为混乱,产品鱼龙混杂,并且该胶囊目前尚未有法定的质量标准,因此,建立该保健食品的质量标准、控制其产品质量和工艺稳定性以保障消费者的健康与权益显得迫在眉睫。目的本课题旨在建立保健食品中国被毛孢菌丝粉胶囊的高效液相色谱指纹图谱和X-射线粉末衍射指纹图谱,并对快速分离测定其功效成分含量的方法进行研究,以达到从多方面控制中国被毛孢菌丝粉胶囊的质量及工艺稳定性的最终目标。方法1通过HPLC-PDA法测定十批次中国被毛孢菌丝粉胶囊,获得其高效液相色谱指纹图谱。采用超声波提取法,以纯水为提取溶剂,提取温度50℃,提取时间90min,以乙腈-0.01moL·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱,Hypersil BOS C18（4.6mm×250mm, 5μm）色谱柱,260nm波长检测。2测定十批次中国被毛孢菌丝粉胶囊XRD粉末衍射图谱,运用相关软件对谱图进行寻峰,优化,从而得出该胶囊的XRD特征峰,最终获得其XRD指纹谱。并与市售功效及化学成分相似保健品XRD指纹谱进行分析对比。粉末衍射采用日本Rigaku MiniFlexⅡ粉末X射线衍射仪,CuMo辐射,石墨单色器,管压30 kV,管流15mA,2θ扫描范围5°-55°,扫描速度5°/min,步长0.02°,发散狭缝1.25°,接收狭缝0.3mm,防散射狭缝1.25°。3通过HPLC-PDA法测定中国被毛孢菌丝粉胶囊中游离麦角甾醇的含量。采用95%乙醇为提取溶剂,80℃超声提取90min,以纯甲醇为流动相,UltimateTM AQ-C18（4.6×250mm,5μm）色谱柱,1.0mL·min-1流速,柱温30℃,检测波长282nm。结果1建立了保健食品中国被毛孢菌丝粉胶囊中核苷类水溶性成分的高效液相指纹图谱,以活性成分腺苷为参照物,确立了19个共有峰,共有峰面积占总峰面积的95%以上,十批次S1-S10样品谱图之间的相似度在0.988-0.974之间,均在0.900之上。2运用特征峰和整体模糊衍射图形相结合的模式建立了保健食品中国被毛孢菌丝粉胶囊X-射线粉末衍射特征指纹图谱。通过Origin7.5软件对原始谱图进行平滑和寻峰处理,共确立了7个共有峰。通过计算可知,十批次中国被毛孢菌丝粉胶囊的相关系数均大于0.9950,夹角余弦值均大于0.9996。市售类似品人工北虫草冻干粉和元康胶囊所获得的XRD谱图与中国被毛孢菌丝粉胶囊XRD谱图宏观趋势相近,特征峰有所差异,它们与中国被毛孢菌丝粉胶囊对照图谱相似度评价值分别为0.6333、0.8597。3建立了中国被毛孢菌丝粉胶囊中游离麦角甾醇的最佳提取方法及高效液相色谱含量测定方法,三个不同批次中国被毛孢菌丝粉胶囊中游离麦角甾醇的平均含量分别为1.6489、1.6858、1.5827mg·g-1,在18.0-180.0μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。游离麦角甾醇的检测限为340ng·mL-1。游离麦角甾醇的平均加样回收率为100.45%。结论1建立的中国被毛孢菌丝粉胶囊核苷类水溶性成分高效液相色谱指纹图谱,专属性强、重现性好,可以有效的反应该产品批次间质量及工艺的稳定性,从一侧面为该产品提供可靠的质量评价依据；2运用X射线粉末衍射技术建立的中国被毛孢菌丝粉胶囊XRD指纹图谱专属性强,反应信息量大,与HPLC指纹图谱相辅相成,既可快速评价产品批次间质量稳定性也可运用于类似产品的鉴别。本研究开辟了保健食品运用XRD技术进行质量控制和类似品鉴别的新思路；3建立的中国被毛孢菌丝粉胶囊中游离麦角甾醇含量测定方法,样品前处理简单、回收率高、测定结果准确、重现性好、能满足检测机构快速检测的需求,为虫草类保健食品测定游离麦角甾醇提供了简便可行的方法。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1 保健食品的定义、种类、市场前景及其质量控制现状
• 1.1 保健食品的定义、种类
• 1.2 保健食品的市场前景
• 1.3 保健食品的质量控制现状
• 2 保健食品质量控制的新技术新方法
• 2.1 高效液相色谱（HPLC）指纹图谱
• 2.2 气相色谱（GC）指纹图谱
• 2.3 红外（IR）指纹图谱
• 2.4 高速逆流（HSCCC）指纹图谱
• 2.5 X-射线粉末衍射（XRD）指纹图谱
• 第二章 实验仪器及材料
• 1 实验仪器
• 2 实验试剂
• 3 实验样品
• 4 标准品
• 第三章 中国被毛孢菌丝粉胶囊高效液相色谱指纹图谱研究
• 1 实验方法
• 1.1 色谱条件
• 1.2 对照品溶液的制备
• 1.3 供试品溶液的制备
• 1.4 测定方法
• 2 实验条件优选
• 2.1 色谱条件优选
• 2.2 供试品制备条件的优化
• 3 中国被毛孢菌丝粉胶囊高效液相指纹图谱的建立
• 3.1 采集时间的选择
• 3.2 共有指纹峰的标定
• 3.3 参照物峰的确定
• 3.4 指纹图谱的分析与评价
• 3.5 指纹图谱相对保留值的确定
• 4. 色谱指纹图谱的方法学验证
• 4.1 专属性
• 4.2 精密度试验
• 4.3 重现性试验
• 4.4 稳定性试验
• 5 样品指纹图谱相似度评价
• 5.1 相似度评价的基本软件
• 5.2 样品相似度测定
• 6 小结
• 7 讨论
• 第四章 中国被毛孢菌丝粉胶囊X射线粉末衍射FOURIER指纹图谱研究
• 1. 实验方法
• 1.1 仪器方法
• 1.2 供试品的制备
• 2 实验条件选择与优化
• 2.1 管电流、管电压的选择
• 2.2 测量法的选择
• 2.3 扫描速率的选择
• 2.4 测量角度范围的选择
• 3. X-射线粉末衍射指纹图谱的建立
• 3.1 指纹图谱的建立
• 3.2 指纹图谱的处理与辨析
• 4. 指纹图谱相似度评价
• 4.1 相似度评价方法
• 4.2 样品指纹图谱相似度计算
• 5. 相似产品XRD指纹图谱分析比较
• 5.1 市售相似保健食品的选择
• 5.2 市售类似保健食品XRD指纹图谱的建立
• 5.3 市售类似保健食品谱图对比辨析
• 5.4 相似度评价对比
• 6. XRD指纹图谱分析小结
• 7. 讨论
• 第五章 高效液相色谱法测定中国被毛孢菌丝粉胶囊中游离麦角甾醇含量研究
• 1 实验方法
• 1.1 色谱条件与系统适用性
• 1.2 对照品储备液的制备
• 1.3 对照品溶液的配制
• 1.4 供试品溶液的制备
• 1.5 测定及计算
• 2 实验条件选择与优化
• 2.1 色谱条件的优化
• 2.2 供试品制备条件的选择
• 3 样品的色谱分离测定
• 4 方法学的考察
• 4.1 标准曲线的线性与检测限
• 4.2 精密度试验
• 4.3 稳定性试验
• 4.4 重复性试验
• 4.5 加样回收率试验
• 5 样品含量测定
• 6 小结
• 7 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 文献综述
• 参考文献
• 个人简历