论文摘要
原发性肝癌发病率位于肿瘤发病率第五位,是严重危害人类健康的重大疾病。近期研究表明,原发性肝癌发病率呈上升趋势。在我国每年死于肝癌约11万人。肝癌手术切除率低,对化疗药物不敏感,缺乏有效的系统治疗策略,且在治疗过程中容易产生耐药和复发,导致治疗失败。因此,深入研究肝癌发病机制并发展新的治疗策略是关系人类健康的重大科学问题。HPPCn（Hepatopoietin cn）是我们从新生小牛肝脏中分离到的一个新的肝细胞刺激因子,生物活性分析表明,重组人HPPCn蛋白能够特异的促进原代培养大鼠肝细胞、正常肝细胞系L02和肝癌细胞系SMMC7721/HepG2的DNA合成和细胞分裂。动物实验显示重组HPPCn蛋白能够促进70%肝切除小鼠的肝脏再生,对CCl4诱导的急性肝损伤和肝纤维化有明显的保护作用。因为其在肿瘤细胞中呈现出高表达,那么HPPCn和肝癌的发生、发展会有着什么样的关系呢?我们研究HPPCn及其信号途径在肝癌发生发展中的作用。为此做了如下的研究工作。首先,构建和制备了携带小鼠Alb启动子和增强子序列的HPPCn的肝特异性真核表达载体,并在体外水平对载体的肝特异性表达进行验证,结果表明HPPCn在HEK293,L02,HepG2,SMMC7721细胞中的表达量分别为0.94%,35.48%,58.94%,62.51%。为研究转基因动物体内肝脏过表达HPPCn对肝癌发生的影响奠定了基础。同时我们还构建了HPPCn有效干涉载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA,在蛋白水平的干涉率达到76.4% ,并通过G418筛选获得了稳定干涉HPPCn的HepG2/si-HPPCn的细胞,为研究肿瘤细胞中HPPCn的功能奠定了基础。其次,我们研究了HPPCn对肝癌细胞及肝干细胞特性的影响。实验表明,HPPCn能够保护TSA诱导的肝癌细胞的凋亡,促进肿瘤细胞的增殖。上调肝癌细胞中MCl-1的表达,并且确定这种上调作用是通过PI3K/AKT,JAK-STAT3两条信号通路来实现的。我们通过干涉肿瘤细胞中HPPCn的表达,证明HPPCn表达的下调能够抑制细胞的增殖、增加细胞的凋亡率,抑制细胞迁移和克隆形成率,并且FAK磷酸化程度降低。我们利用WB-F344细胞作为模型,研究HPPCn对肝干细胞特性的影响,结果表明HPPCn能够促进WB-F344细胞的增殖,促进细胞的迁移,增加细胞的克隆形成率,激活WB-F344细胞的SPK,Erk,Stat3三条信号通路,证明HPPCn可能在肿瘤发生过程中发挥一定的作用。最后,我们在体内研究了HPPCn对肿瘤发展的影响。用裸鼠作为动物模型,建立皮下移植正常HepG2和HepG2/si-HPPCn细胞的移植瘤模型。实验结果表明接种HepG2细胞后给予Ad-HPPCn刺激的裸鼠的肿瘤大于给予PBS和Ad-GFP组;接种HepG2/si-HPPCn细胞的裸鼠肿瘤体积小于接种正常HepG2细胞。这和体外实验的结果是一致的。综上所述,我们的研究结果表明HPPCn及其信号途径在肿瘤发生、发展过程中起着非常重要的作用,该研究结果将为原发性肝癌治疗提供新的治疗靶点。
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相关论文文献
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