超声作用对绵羊胎儿成纤维细胞转染效率的影响

论文摘要

近年来研究发现用低功率、低频率的超声波辐射细胞，可使细胞表面瞬间造成微小的创伤，使细胞壁局部破裂，从而使细胞质膜的通透性得到改变，可使细胞内物质释放和胞外物质进入到细胞内。将超声波技术和脂质体转染技术有效的结合起来，不仅能明显的提高脂质介导的基因转染效率，还能增强基因转染的特异性。本实验采用了超声波技术对经脂质体介导的绵羊胎儿成纤维（sheep foetusfibroblasts,SFF）细胞转染效率的影响。用不同频率和时间的超声辐照经脂质体介导SFF细胞，用PCR、RT-PCR检测目的基因，用G418挑选转基因单克隆细胞，计算转染率。主要结果如下：1.辐射前、后进行转染（辐照时间60s、辐射频率为2.5MHz时）基因的转染效率不同，先辐射细胞后转染的转染效率要明显高于先转染后辐射的转染效率。2.脂质体、质粒混合液与细胞共同辐射（辐照时间60s、辐射频率为2.5MHz）再转染，基因的转染效率最高为（9.00±0.64）。3.对SFF细胞辐射（辐射时间60s、辐射频率2.5MHz）的细胞生存率要明显高于辐射（辐射时间60s、辐射频率3.5MHz）。辐射频率为5.0MHz，辐照时间为30s、60s、120s时，对细胞的生存率影响较大。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 缩略词表
• 第一章 文献综述
• 1.1 超声波研究的进展
• 1.1.1 超声波研究现状
• 1.1.2 超声波的特性
• 1.2 基因转染技术的进展
• 1.2.1 研究概况
• 1.2.2 基因转染技术
• 1.3 影响基因转染的因素
• 1.3.1 转染试剂
• 1.3.2 细胞状态
• 1.3.3 转染方法
• 1.3.4 DNA的浓度和纯度
• 1.3.5 血清
• 1.3.6 抗生素
• 1.3.7 氮磷（N/P）比
• 1.4 超声波介导转基因的优点
• 1.5 小结
• 第二章 质粒DNA提取及纯化
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 器材与试剂
• 2.1.2.1 主要器材
• 2.1.2.2 主要试剂
• 2.1.2.3 试验流程
• 2.1.2.4 质粒转化大肠杆菌的培养
• 2.1.2.5 质粒DNA的提取及检测
• 2.1.2.5.1 质粒DNA的提取（百泰克去内毒素高纯度质粒提取试剂盒）
• 2.1.2.5.2 质粒DNA的检测
• 2.2 质粒DNA的线性化及纯化
• 2.2.1 质粒DNA的线性化
• 2.2.2 质粒DNA的纯化
• 2.2.3 纯化后质粒DNA 的检测
• 2.3 小结
• 第三章 SFF细胞转染实验及检测
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 试验材料
• 3.1.1.2 主要药品与试剂
• 3.1.1.3 主要仪器设备
• 3.1.1.4 主要操作液配方
• 3.1.2 SFF细胞的培养及敏感性筛选
• 3.1.2.1 SFF细胞的培养
• 3.1.2.2 SFF细胞的冻存
• 3.1.2.3 SFF细胞的解冻
• 3.1.2.4 SFF细胞对G418 毒性敏感性筛选
• 3.1.3 试验设计
• 3.1.3.1 试验分组及方法
• 3.1.3.2 G418 阳性克隆点的筛选及转染效率计算
• 3.1.3.3 基因表达的检测
• 3.1.3.4 台盼蓝染色检测细胞活性
• 3.1.4 试验数据的统计分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 SFF细胞对G418 敏感性检测结果
• 3.2.2 SFF细胞sFat-1 基因的转染、筛选及测定
• 3.2.3 基因的转染效率的检测
• 3.3 讨论
• 3.3.1 G418 毒性对SFF的影响
• 3.3.2 辐射前、后进行转染的基因转染效率
• 3.3.3 脂质体、质粒混合液与细胞共同辐射后再转染的基因转染效率
• 3.3.4 超声辐射对SFF细胞的生存率的影响
• 第四章 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 导师简介
• 个人简介