葛根素对AngⅡ诱导血管内皮细胞组织因子表达的影响及机制研究

论文摘要

组织因子（tissue factor,TF）是体内生理性止血和病理性血栓形成中血液凝固的重要启动因子。TF为分子量约47 kD的单链跨膜糖蛋白,既是FⅦ或激活的Ⅶ因子（FⅦa）的受体,又是FⅦa激活FⅩ和FⅨ的必需辅因子。新近大量研究显示:人体内还存在变拼（alternatively spliced,as）TF,它在体内可能具有促凝与抗凝双重作用;因发现不久,所以其确切的生物学和病理生理学意义尚待进一步研究。肾素—血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）是人体内最重要的体液调节系统之一,在维持人体正常组织功能和生命活动中起着重要作用。许多研究显示该系统中的血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）不仅具有升高血压的作用,而且还可影响凝血系统、纤溶系统以及血小板的功能,参与动脉粥样硬化和急性心肌梗死等与血栓形成有关疾病的发生发展。葛根素（Puerarin,Pue）是从中药葛根中分离提纯出来的主要成份,临床上广泛用来防治血栓栓塞性疾病。有报道Pue具有细胞保护、抗氧自由基损伤等多种作用。但是Pue是否能影响AngⅡ诱导的血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）组织因子（tissue factor,TF）表达增加及其机制尚未见报道。研究目的①观察AngⅡ对人脐静脉血管内皮细胞株（HUVECs）TF表达的影响以及Pue对其的干预作用;②探讨Pue抑制AngⅡ诱导内皮细胞TF表达的作用机制。方法HUVECs培养采用DMEM完全培养基;MTT测细胞活力;一期凝固法测总的细胞促凝活性（procoagulant activity,PCA）;TF活性的鉴定用乏Ⅶ血浆和TF单克隆抗体。采用酶联免疫吸附双抗体夹心法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法定量检测TF抗原;采用RT-PCR的方法检测TF mRNA:免疫组织化学染色观察NF-κB的变化。结果①不同浓度的AngⅡ(10-10～10-6mol/l)促进HUVECs细胞TF活性和mRNA的表达,并具有明显的量效关系（r=0.9528,P＜0.05）;②单用Pue（62.5～500 mg/l）不能抑制HUVECs细胞的TF活性（P＞0.05）;在给予AngⅡ之前30 min用Pue（62.5～500 mg/l）预处理HUVECs细胞,Pue可呈剂量依赖式地抑制AngⅡ(10-7mol/l)诱导内皮细胞表达TF PCA,TF抗原和TFmRNA增加的作用（P＜0.05）,在500 mg/l时抑制作用达到最强;500 mg/l Pue抑制AngⅡ(10-7mol/l)对TF表达的刺激作用也呈时间依赖性,在12 h抑制作用最强。③一氧化氮合酶（NOS）的抑制剂L-NAME可明显地阻抑Pue拮抗AngⅡ促进HUVECs TF PCA和TF mRNA的增加的作用（P＜0.05）。④免疫组织化学染色显示HUVECs细胞经AngⅡ处理45 min后,细胞核内NF-κB颗粒明显增多,但经Pue处理HUVECs细胞15 min后,再加入AngⅡ作用45min,核内棕黄色NF-κB颗粒则明显减少。结论①AngⅡ能诱导HUVECs表达TF,Pue具有在mRNA水平抑制AngⅡ刺激HUVECs TF表达的作用;②NO途径参与了Pue抑制AngⅡ诱导HUVECs TF表达的作用:③Pue和AngⅡ可能通过影响NF-κB的活化来改变TF的表达。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、论文
• 第一部分:葛根素对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞组织因子表达的影响
• 1.1 前言
• 1.2 材料和方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 结论
• 1.6 附图
• 第二部分:葛根素对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞表达组织因子的机制研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 2.6 附图
• 四、参考文献
• 五、综述
• 六、致谢
• 七、在读期间所发表（待发表）的论文清单