氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞的诱导分化作用及其机制的研究

论文摘要

近年大量证据表明,某些恶性肿瘤细胞在体内外诱导剂的作用下,可向正常细胞逆转（诱导分化）。诱导分化治疗能使肿瘤细胞重新分化为正常细胞,其本身并无明显细胞毒性、骨髓和免疫抑制等毒性作用,这已成为人类肿瘤治疗的新方向,但目前尚缺乏高效、低毒的分化诱导剂。他汀类药物是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂,已广泛用于临床高血脂的治疗。氟伐他汀（Flu）是其中的一种。他汀类药物具有多向性效应,除降血脂外,它还具有其他生物学作用。然而,有关氟伐他汀（Flu）对人早幼粒白血病HL-60细胞（HL-60细胞）的诱导分化作用尚未见报道。本研究应用细胞学、细胞化学、流式细胞术、分子生物学等技术,观察Flu对HL-60细胞的诱导分化作用、对细胞增殖、细胞周期、凋亡及VEGF基因表达的影响等,并探讨Flu诱导HL-60细胞分化的主要分子机制。本研究结果证明,Flu能诱导HL-60细胞分化;Flu呈剂量和时间依赖方式抑制HL-60细胞的增殖和细胞生长;经Flu处理后,HL-60细胞阻滞在G0/G1期,进入S期细胞减少;Flu能诱导HL-60细胞凋亡;经Flu处理的HL-60细胞VEGF基因表达明显降低。在Flu处理的同时加入甲羟戊酸,可逆转Flu对HL-60细胞的上述影响,提示Flu对HL-60细胞生物行为的作用是甲羟戊酸途径依赖的,这可能是Flu诱导HL-60细胞分化的重要分子机制。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 第一部分 文献综述
• 一、肿瘤细胞的诱导分化及其临床意义
• （一）肿瘤细胞诱导分化的概念
• （二）肿瘤细胞分化的临床意义
• （三）肿瘤细胞诱导分化的机制
• 二、诱导分化剂的种类及其作用机制
• （一）诱导分化剂的种类
• （二）诱导分化剂的作用机制
• （三）肿瘤细胞分化的标志
• 三、他汀类药物及其作为诱导分化剂的研究
• （一）他汀类药物的一般药理作用
• （二）与降血脂有关的作用
• （三）他汀类药物降脂以外的生物学作用
• 四、血管内皮生长因子在肿瘤细胞诱导分化中的作用
• （一）血管内皮生长因子的生物学特点
• （二）血管内皮生长因子与血液系统恶性肿瘤
• 第二部分 实验研究
• 前言
• 实验材料
• 实验一 氟伐他汀对HL-60细胞的分化诱导作用
• 一、细胞分化的形态学观察
• 二、硝基四氮唑蓝（NBT）还原能力测定
• 三、非特异性酯酶染色
• 实验二 氟伐他汀对HL-60细胞增殖和凋亡的影响
• 一、细胞增殖能力的检测
• 二、细胞生长抑制率的测定
• 三、细胞周期分布和细胞凋亡的检测
• 四、氟伐他汀对HL-60细胞caspase-3活性的影响
• 五、Caspase-3抑制剂对HL-60细胞凋亡的抑制作用
• 六、Annexin V染色检测细胞凋亡
• 七、DNA凝胶电泳
• 八、细胞超微结构观察
• 实验三 氟伐他汀对HL-60细胞VEGF mRNA表达的影响
• 方法
• 统计学方法
• 研究结果
• 一、氟伐他汀对HL-60细胞的分化诱导作用
• （一）细胞分化的形态学改变
• （二）NBT还原能力的变化
• （三）非特异性酯酶染色的改变
• 二、氟伐他汀对HL-60细胞增殖和凋亡的影响
• （一）细胞增殖能力的变化
• （二）细胞生长抑制率的改变
• （三）细胞周期分布和细胞凋亡的变化
• （四）细胞caspase-3活性的变化
• （五）Annexin V染色检测细胞凋亡
• （六）DNA梯状条带
• （七）细胞超微结构的改变
• 三、氟伐他汀对HL-60细胞VEGF mRNA表达的影响
• 讨论
• 一、氟伐他汀对HL-60细胞的分化诱导作用
• 二、氟伐他汀抑制HL-60细胞增殖和生长
• 三、氟伐他汀对HL-60细胞周期的影响
• 四、氟伐他汀对HL-60细胞caspase-3活性的影响及意义
• 五、氟伐他汀对HL-60细胞凋亡的诱导作用
• 六、氟伐他汀抑制甲羟戊酸途径的生物学意义
• 七、氟伐他汀对HL-60细胞VEGF mRNA表达的影响
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士学位期间发表的论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢