早孕小鼠子宫内膜CRT的表达规律及意义

论文摘要

目的:本研究运用RT-PCR、原位杂交、Western blotting及间接免疫荧光组织化学等技术,检测未孕及妊娠小鼠子宫内膜CRT基因与蛋白的表达、分布规律、动态变化以及对胚胎植入的影响,有助于从分子水平探讨CRT在胚胎正常着床过程中的分子调控机制,为了解人类正常生殖过程机制和生殖方面疾病的诊断、治疗奠定基础。方法:1.建立NIH小鼠妊娠动物模型,随机将孕鼠分为7组作为实验组,未孕小鼠作为对照组,收集未孕和孕d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7的子宫内膜组织,分别于-80℃冻存备用。2.运用RT-PCR和原位杂交检测CRT mRNA在小鼠子宫内膜的表达规律;3.运用间接免疫荧光组织化学及Western blotting法检测CRT蛋白在小鼠子宫内膜表达水平;4.于孕3天晚8时小鼠子宫角注射CRT反义寡核苷酸,于孕8天观察着床胚数。结果:1. RT-PCR分析表明,各组小鼠子宫内膜均有CRT mRNA,但妊娠小鼠子宫内膜表达明显高于未妊娠,且随着妊娠天数的增加呈逐渐增加的趋势,在妊娠d4、d5呈现最高峰。2.原位杂交结果与RT-PCR结果基本一致。杂交阳性信号定位于基质细胞、腺上皮以及腔上皮的胞浆中,为紫蓝色细砂样至黑紫色粗颗粒状。3.间接免疫荧光组织化学结果显示,CRT蛋白在妊娠与未妊娠小鼠子宫内膜均有表达,但妊娠子宫内膜表达明显高于未妊娠。妊娠d4、d5达到最高峰,与妊娠d4、d5相比妊娠d6、d7略有下降,但显无著意义（P>0.05）。CRT蛋白绿色荧光阳性信号主要定位于基质细胞、腺上皮以及腔上皮的胞浆中。4. Western blotting结果与间接免疫荧光组织化学结果基本一致,并且表达的是46kDa CRT 5. CRT反义寡核苷酸宫内注射显示,与对照组相比CRT反义寡核苷酸注射组的胚泡着床数量明显减少（p<0.05）。结论1. CRT基因及蛋白在未孕及早孕小鼠子宫内膜均有表达,并且妊娠鼠子宫内膜CRT的表达明显高于未孕子宫内膜,提示CRT可能涉及到胚胎着床的整个过程并可能扮演重要的角色。2.CRT在植入窗口期的高表以及在小鼠子宫内膜的分布变化提示CRT可能参与了胚胎着床最初的黏附过程,通过促进细胞-细胞外基质的黏附而使子宫内膜容受性达到最佳状态,从而影响滋养层细胞与子宫内膜的相互作用以利于胚胎的植入。3. CRT反义寡核苷酸在基因水平阻断其翻译成蛋白质,进而阻断其生理功能,发现着床胚泡数明显减少,推测其很可能在胚胎植入中扮演重要的角色。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 早孕小鼠子宫内膜CRT 的表达规律
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第二部分：CRT 在小鼠胚胎着床过程中作用的初步研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 全文小结与展望
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文