犬瘟热DNA疫苗的构建及免疫实验的研究

论文摘要

犬瘟热病毒（CDV）属于副粘病毒科（family Paramyxoviridae）麻疹病毒属（genus Morbillivirus）成员,为有囊膜的负链线性RNA病毒,自然条件下犬瘟热病毒感染食肉目中犬科、鼬科、浣熊科等多种动物,猫科动物也可感染。是当前对养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疾病之一。防治犬瘟热的有效途径是疫苗接种,虽然灭活疫苗和弱毒疫苗在控制犬瘟热发生上起了一定作用,但随着使用的广泛,也发现了许多缺陷,弱毒苗可引起免疫抑制和中枢神经系统的损坏;随着CDV宿主谱日趋扩大,弱毒疫苗的使用还可能致死某些易感动物并带来散毒的危险。此外,CDV本身的变异也可能导致疫病的流行。因此,必须寻找更安全、有效、实用的新型疫苗。基因疫苗和重组活载体疫苗是近年来研究比较热的新型疫苗,在预防免疫方面也取得很大进展。最新研究表明CDV融合蛋白（F）和血凝素（H）蛋白是宿主免疫系统的主要目的抗原,是产生中和抗体的重要抗原之一。核衣壳（N）蛋白是保守性较强的免疫原性蛋白,此外N蛋白上含有T细胞表位。H,F和N蛋白在犬瘟热的免疫预防方面起重要作用。为了研制新一代安全、高效的CDV基因工程疫苗,本研究根据GeneBank已发表的犬瘟热病毒H、F和N基因序列,设计四对特异引物,经RT-PCR扩增后,连接到pMD18-T载体,序列测定证明各基因序列正确。然后将各基因亚克隆到真核表达载体pIRES1neo中,构建成四种重组真核表达质粒,经过Western—blot鉴定证明各重组质粒可以表达相应的目的蛋白。之后以构建的真核表达质粒pIRES H、pIRES F、pIRES N1和pIRES N2为基因疫苗,进行了小鼠和貉子的动物免疫试验,对免疫鼠和貉子体内免疫应答水平进行了ELISA检测,并对貉子进行了攻毒保护实验。结果显示:所构建的基因疫苗可以诱导小鼠和貉子产生特异性免疫应答反应,虽然貉子在经过三次基因免疫后仍不能完全抵抗强度攻击（保护率为33%到100%不等）,但弱毒疫苗也有貉子攻毒后死亡,不能对貉子产生完全的保护。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1 我国犬瘟热的流行现状与研究现状
• 2 犬瘟热的免疫与预防
• 第二章 ELISA方法诊断犬瘟热的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第三章 犬瘟热基因免疫真核表达质粒的构建
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第四章 小白鼠实验
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第五章 貉子实验
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第六章 讨论
• 第七章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介