论文题目: 乳糖化PEI-磁性纳米粒载体介导的血管抑素基因治疗肝癌的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 刘新生
导师: 张阳德
关键词: 血管抑素,肝癌细胞,纳米粒,载体,基因治疗,种植瘤
文献来源: 中南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 近年来，随着分子生物学的发展，抗血管生成疗法（Antiangiogenosis therapy）治疗肿瘤格外引人注目，尤其是以血管抑素（Angiostatin）为代表的血管抑制剂对肿瘤的基因治疗更是当今的研究热点。肝癌是具有双重血供的肿瘤，有丰富的血管供其营养。因而，对其进行抗血管生成治疗必将会有令人惊奇的疗效。其意义在于，该疗法有可能摆脱目前传统方法对肝癌疗效不能令人满意的困境，从而成为治疗肝癌的新策略。 问题是，基因治疗必须有合适的载体来完成，而目前的基因载体都不能令人满意。无论是病毒载体还是非病毒脂质体载体都存在不同程度的自身缺陷，不能很好的胜任体内的转基因治疗。因而寻找一种理想的基因载体就成为当务之急。 近年来，纳米粒基因载体的出现为克服上述困难提供了可能。纳米粒与传统的基因载体相比较有其独特的优势，不仅具有生物相容性好、携药量大、安全性高以及易于制备、成本低等优点，而且可以通过对其表面改性或吸附某些受体进一步提高基因的转染效率和靶向性能。因而，纳米粒是一个很有应用前景的基因治疗载体。 本研究以磁性四氧化三铁纳米粒为核，聚乙烯亚胺（polyethylenimine，PEI）为壳，同时进行乳糖化修饰，制备出对肝脏具有双靶向性能的乳糖化PEI-磁性纳米粒载体，并对其表征、性能以及体内外转基因能力进行了检验。结果显示，纳米粒成球型，颗粒均匀，平均直径为46nm。乳糖化磁性Fe3O4纳米粒在200μg/ml时对组织细胞是安全的；与DNA质量比为3：1时，包封率最高，可达95％左右；接近血浆内环境PH值时结合力最稳定。所制得的乳糖化PEI-Fe3O4纳米粒具有磁响应性、生物相容性、长循环功能等特点。与脂质体相比，对组织细胞的毒性小。具备了理想基因载体应有的特点。转染实验表明，乳糖化磁性Fe3O4纳米粒在体内外均可成功地将所携基因转染到肝癌细胞内并有分泌活性。进一步研究表明，转染后的血管抑素基因可以在裸鼠的种植瘤体内通过相对减少VEGF而抑制肿瘤新生微血管的形成，进而诱发肿瘤细胞的凋亡，最后发挥抑制肿瘤生长的作用。每周一次，每次20μg的剂量即可达到治疗效果。因此，乳糖化PEI-磁性纳米粒载体是一种较为理想的基因载体，由其携带血管抑素转基因治疗肝癌的方法，
论文目录:
英文缩写注解
前言
技术路线
中文摘要
英文摘要
第一部分 pcDNA3.1-Angiostatin质粒的扩增、提纯及鉴定
一、引言
二、材料与方法
三、实验结果
1.质粒pcDNA3.1-angiostatin的酶切鉴定
2.质粒pcDNA3.1(+)和pEGFP-C2的酶切鉴定
3.紫外分光光度计测定质粒的纯度和含量
四、讨论
五、结论
参考文献
第二部分 乳糖化PEI-磁性纳米粒的制备、特性及其与质粒DNA的连接
一、引言
二、乳糖化PEI-Fe_3O_4复合磁性纳米粒制备
三、乳糖化PEI-Fe_3O_4复合磁性纳米粒性能检测
1.纳米粒子的粒径侧定及形态的观察
2.纳米粒子的磁响应性观察
3.铁离子浓度的测定
4.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对DNA的结合实验
5.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对DNA的结合效率测定
6.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对DNA的保护实验
7.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对细胞的毒性实验
8.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP/DNA在血清中的稳定性观测
9.巨噬细胞对纳米粒的吞噬实验
四、实验结果
1.纳米粒子的粒径侧定及形态的电子显微镜分析(TEM)检测
2.磁响应性观测结果
3.铁离子浓度的测定分析
4.PH值对乳糖化PEI-Fe_3O_4NP与DNA结合能力的影响分析
5.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对DNA的结合效率分析
6.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对DNA的保护实验
7.乳糖化PEI-Fe_3O_4NP对细胞的毒性测定
8.血浆内的稳定性
9.巨噬细胞对PEI-Fe_3O_4NP、乳糖化PEI-Fe_3O_4NP的摄入
五、讨论
六、结论
参考文献
第三部分 乳糖化PEI-磁性纳米粒介导的pcDNA3.1-Angiostatin对人HepG2肝癌细胞的体外转染实验
一、引言
二、材料与方法
三、实验结果
1.载质粒pEGFP-C2乳糖化PEI-磁性纳米粒HepG2细胞转染实验
2.外加磁场对乳糖化PEI-磁性纳米粒转染的影响
3.竞争拮抗实验
4.载pcDNA3.1-angiostatin基因纳米粒转染HepG2细胞后RT-PCR检测结果
5.RT-PCR产物的测序结果
四、讨论
五、结论
参考文献
第四部分 纳米粒介导的pcDNA3.1-Angiostatin对人HepG2肝癌细胞的体内转染实验及其对裸鼠肝癌模型治疗的初步观测
一、引言
二、材料与方法
三、实验结果
1.动物模型
2.抑瘤作用的观测结果
3.瘤组织内mANG mRNA表达情况
4.MVD的测定结果
5.VEGF的测定结果
6.肿瘤组织细胞凋亡情况
四、讨论
五、结论
参考文献
第四部分 附图
总结论
综述部分
一、血管抑素基因对肿瘤治疗的研究进展
参考文献
二、纳米粒基因载体的研究现状与展望
参考文献
致谢
攻读学位期间主要研究成果
发布时间: 2006-11-27
参考文献
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