具有黏附性乳杆菌的筛选与特性研究

论文摘要

黏附定植特性是益生菌筛选的重要指标之一,本文从15株乳杆菌中筛选出有较强黏附性的唾液乳杆菌水杨素亚种CH10（Lactobacillus salivarius）和小鼠乳杆菌M8（Lactobacillus murinus ）2株,对它们的部分生理性状、肠胃耐受能力、调节动物肠道菌群能力以及供试菌株安全性进行了研究,以期为优良的乳酸菌发酵剂及微生态制剂的研发提供理论依据和技术支持。1、采用碳烃化合物黏着技术（WATH）检测供试菌株的疏水性和自聚集性表明,15株乳杆菌中3株具有较高的表面疏水性,分别是菌株Ind3（31.75±1.46）%、菌株CH10（29.81±1.27）%和菌株M8（22.45±1.74）%,且菌株表面疏水性与其自聚集性存在较强一致性。2、对3株菌的生长特性、耐盐性、耐酸性和肠胃环境耐受能力研究表明,菌株Ind3无法耐受pH 2.5的酸性环境;菌株CH10和M8能够在18%浓度的NaCl条件下生长,能耐受pH 2.5的酸性环境。模拟肠胃环境表明,菌株CH10和M8对胆汁盐、胰蛋白酶和胃蛋白酶均具有良好的耐受性。经形态学、生理生化特性以及16S rDNA扩增与测序,确定菌株CH10为唾液乳杆菌水杨素亚种（Lactobacillus salivarius）,菌株M8为小鼠乳杆菌（Lactobacillus murinus）。3、对灌胃小鼠体重增长、粪便中β-半乳糖苷酶活性及肠道菌群分析表明,当给小鼠饲喂含有1×109cfu/mL的唾液乳杆菌水杨素亚种CH10和小鼠乳杆菌M8的脱脂乳菌悬液10d后,小鼠体重增长及β-半乳糖苷酶活性明显高于对照组,肠道菌群中的有益菌（双歧杆菌、乳杆菌）数量得到明显改善,有害菌（肠杆菌、肠球菌、产气荚膜梭菌）数量明显减少,表明外源服用唾液乳杆菌水杨素亚种和小鼠乳杆菌能够在肠道内定植,平衡有益和有害微生物菌群。4、实验组小鼠肝、肾解剖分析发现,灌胃益生菌组小鼠肝脏和肾脏与对照组均无明显差异,表明2株实验用菌株比较安全,可用于微生态制剂开发和研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 1.1 乳酸菌
• 1.1.1 乳酸菌简介
• 1.1.2 乳酸菌国内外研究现状
• 1.1.3 乳酸菌的健康功效
• 1.1.4 乳酸菌筛选评估标准
• 1.2 乳酸菌黏附机制研究现状
• 1.3 菌株疏水性与黏附性的关系及研究方法
• 1.3.1 菌株疏水性与黏附性的关系
• 1.3.2 疏水性的研究方法
• 1.4 肠道菌群及其作用
• 1.5 研究肠道菌群的方法
• 1.5.1 经典研究方法
• 1.5.2 对肠道微生物菌群研究的新方法
• 1.6 研究内容及意义
• 1.7 技术路线
• 2 材料与方法
• 2.1 试验菌株及来源
• 2.2 培养基及培养条件
• 2.2.1 MRS 培养基
• 2.2.2 鉴定培养基
• 2.2.3 选择性培养基
• 2.2.4 脱脂乳
• 2.2.5 培养条件
• 2.3 主要试剂以及仪器设备
• 2.3.1 主要试剂以及材料
• 2.3.2 主要仪器设备
• 2.4 研究方法
• 2.4.1 黏附性菌株的初筛
• 2.4.2 胃肠环境耐受性测定
• 2.4.3 菌株生长特性研究
• 2.4.4 菌种鉴定
• 2.4.5 动物实验
• 2.4.6 菌株对小鼠肝脏和肾脏器官的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 黏附性菌株的初筛
• 3.1.1 菌株表面疏水率的测定
• 3.1.2 菌株自聚集性的测定
• 3.2 胃肠环境耐受性测定
• 3.2.1 耐酸性实验
• 3.2.2 耐胆盐实验
• 3.2.3 耐胃蛋白酶实验
• 3.2.4 耐胰蛋白酶实验
• 3.3 菌株生长特性研究
• 3.4 菌株鉴定
• 3.5 动物实验
• 3.5.1 灌胃乳杆菌对小鼠体重的影响
• 3.5.2 菌株小鼠粪便中β-半乳糖苷酶活性的影响
• 3.5.3 肠道菌群的测定
• 3.6 菌种对小鼠肝脏和肾脏器官的影响
• 4 讨论
• 4.1 黏附性菌株的筛选
• 4.1.1 疏水性和自聚集性的测定
• 4.1.2 菌株生长特性及胃肠消化道耐受性研究
• 4.2 动物实验
• 4.2.1 菌株对小鼠体重的影响
• 4.2.2 菌株对小鼠粪便中β-半乳糖苷酶活性的影响
• 4.2.3 菌株对小鼠肠道菌群的影响
• 4.3 菌株对小鼠肝脏和肾脏器官的影响
• 5 结论
• 参考文献
• 附录1
• 附录2
• 在读期间发表的学术论文
• 作者简历
• 致谢