论文摘要
为探讨妊娠、泌乳期小鼠下丘脑、垂体、外周内分泌腺中催乳素释放肽（PrRP）及其受体（PrRP-R） mRNA的表达规律,首先取小鼠下丘脑,提取RNA,进行RT-PCR。PCR产物与pMD-19T连接后转化E. coli DH5a,检测阳性克隆并测序,克隆出小鼠PrRP基因。利用DNAstar软件对小鼠PrRP基因进行序列分析,并和大鼠、人、牛、绵羊PrRP核苷酸、氨基酸序列进行比较。然后选用36只雌性小鼠,随机分为6组（n=6）。分别在妊娠6,12,18d和泌乳6,12,18 d处死小鼠,取下丘脑、垂体、甲状腺、肾上腺、卵巢组织,提取RNA。以GAPDH作为参照,利用半定量RT-PCR方法测定PrRP、PrRP-R mRNA在下丘脑、垂体、外周内分泌腺中相对表达水平。同时采取血样,制得血浆,通过放射免疫法（RIA）测定血浆孕酮（P）、雌二醇（E2）和催乳素（PRL）水平。运用SPSS13.0软件对组织PrRP、PrRP-R mRNA水平和血浆P、E2、PRL水平进行双侧相关分析,探究下丘脑、垂体、外周内分泌腺PrRP、PrRP-R mRNA与血浆P、E2、PRL的相关关系。基因克隆结果表明,小鼠PrRP基因阅读框（ORF）全长276bp,编码92个氨基酸。核苷酸同源性分析表明小鼠PrRP与大鼠、绵羊、牛、人PrRP核苷酸同源性分别为88.5%、74.8%、73.3%、78.2%。氨基酸同源性分析表明小鼠PrRP与大鼠、绵羊、牛、人PrRP氨基酸序列同源性分别为87.1%、71.6%、70.5%、71.6%。小鼠PrRP-31与大鼠、绵羊、牛、人PrRP-31氨基酸序列同源性分别为100.0%、93.8%、93.8%、84.4%；PrRP-20氨基酸同源性分别为100.0%、95.0%、95.0%、90.0%。几种种属PrRP氨基酸的核心序列同为RGIRPVGRFGRRRA（45-58）,此段氨基酸序列为哺乳类PrRP的保守序列和特征序列,可进一步修饰为RF肽。PrRP mRNA表达规律研究表明：妊娠、泌乳期下丘脑、垂体、甲状腺、肾上腺、卵巢中都有PrRP mRNA的表达。其中表达水平最高的组织为卵巢,其次为下丘脑。妊娠期甲状腺、卵巢PrRP mRNA表达水平和下丘脑表达水平呈显著正相关关系,肾上腺PrRP mRNA表达水平和垂体表达水平呈显著正相关关系,提示下丘脑PrRP可能通过影响甲状腺、卵巢PrRP,而垂体PrRP通过影响肾上腺PrRP参与妊娠的调控。泌乳期PrRP mRNA表达方面,甲状腺、肾上腺、卵巢和垂体,垂体和下丘脑都呈正相关关系,结果提示泌乳期机体可能通过下丘脑、垂体正向调控甲状腺、肾上腺、卵巢PrRP mRNA的表达,参与机体泌乳的相关调控。妊娠、泌乳期下丘脑、垂体、外周内分泌腺中PrRP mRNA表达水平的变化提示PrRP可能通过下丘脑、垂体、外周内分泌腺参与妊娠、泌乳的调控。PrRP-R mRNA表达规律研究发现：妊娠、泌乳期PrRP-R mRNA在下丘脑、垂体、甲状腺、肾上腺、卵巢中都有表达。其中妊娠期甲状腺、下丘脑表达水平显著著高于垂体表达水平。妊娠期下丘脑PrRP-R与垂体PrRP显著正相关,与卵巢PrRP显著负相关,提示垂体PrRP可通过作用下丘脑调节相关生理活动,而卵巢PrRP可能通过作用于非下丘脑器官参与机体调节。泌乳期下丘脑PrRP-R与甲状腺PrRP显著正相关,而甲状腺PrRP-R与下丘脑PrRP显著负相关,提示在甲状腺PrRP可反馈作用于下丘脑,而下丘脑PrRP可能通过作用于垂体,而不是直接作用于甲状腺进行作用；垂体PrRP-R与卵巢PrRP显著正相关,提示泌乳期卵巢PrRP可能通过作用于垂体调节相关泌乳活动。血浆激素分析结果表明：妊娠期小鼠血浆P水平与垂体PrRP mRNA表达量显著负相关,提示妊娠期血浆高水平的P可能通过抑制垂体PrRP的表达,进而影响下丘脑,调节相关妊娠活动。泌乳期小鼠血浆E2水平与卵巢PrRP mRNA表达量之间显著负相关,提示卵巢PrRP可能直接抑制卵巢的分泌活动,或者通过作用于垂体间接调节卵巢分泌活动,进而影响泌乳相关生理活动。妊娠、泌乳期内血浆PRL与下丘脑、垂体、卵巢等组织中PrRP及其受体表达量均无显著相关关系,提示血浆PRL水平可能不受组织中的PrRP表达的影响。