补肾化痰法影响骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化的实验研究

论文摘要

目的:从形态学、标志物蛋白合成（LPL、ALP、OCN）的角度,分别观察补肾法、化痰法、补肾化痰法对BMSCs成脂分化和成骨分化的影响,探讨补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法:1.运用全骨髓贴壁法分离培养纯化Wsitar大鼠BMSCs,2.从细胞形态学、流式细胞仪检测细胞表面抗原等角度进行鉴定BMSCs。3.使用1μmol/L地塞米松、0.5mmol/L IBMX、0.2mmol/L吲哚美辛、10μg/mL胰岛素联合诱导BMSCs成脂分化,通过细胞形态学观察、油红O染色及定量和用RT-PCR检测脂蛋白脂酶（LPL）mRNA表达,探讨补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药分别对BMSCs成脂分化的影响。4.使用0.1μmol/L地塞米松,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠,50μg/mL Vitamin C联合诱导BMSCs成骨分化,通过检测茜素红染色及定量、碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙素（OCN）mRNA表达,探讨补肾中药、化痰中药和补肾化痰中药对BMSCs成骨分化的影响。结果:1.采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠BMSCs。2.流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志抗原CD29、CD44表达阳性,CD45表达阴性。3.化痰中药能使BMSCs诱导形成的脂肪细胞减少,并下调成脂相关基因LPL-mRNA表达。4.补肾化痰中药能促进BMSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调OCN-mRNA表达。结论:补肾化痰法治疗骨质疏松症的可能作用机制是:化痰法抑制BMSCs向脂肪细胞分化,补肾化痰法促进BMSCs向成骨细胞分化。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略语
• 前言
• 第一部分 理论探讨
• 1 概述
• 2 中医经典文献对骨质疏松症的认识
• 3 现代中医对骨质疏松症的研究
• 4 问题与思考
• 5 参考文献
• 第二部分 立论依据
• 1. 骨衰老
• 2. 痰浊与衰老
• 3. 痰浊与骨质疏松症
• 4. 本课题的学术思想
• 5. 本课题研究思路与目的
• 6. 参考文献
• 第三部分 实验部分
• 实验一 Wsitar大鼠BMSCs分离、纯化、培养及鉴定
• 1 研究目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 6 小结
• 7 参考文献
• 附图
• 实验二 补肾化痰法对Wistar大鼠BMSCs成脂分化的影响
• 1 实验目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 6 参考文献
• 附图
• 实验三 补肾化痰法对Wistar大鼠BMSCs成骨分化的影响
• 1 实验目的
• 2 实验材料
• 3 实验方法
• 4 实验结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 6 参考文献
• 附图
• 第四部分 结论
• 第五部分 综述
• 综述一 骨质疏松症与骨髓间充质干细胞的关系
• 综述二 中药对骨髓间充质干细胞成脂和成骨分化的研究进展
• 致谢