论文题目: 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WY45产β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 食品科学与工程
作者: 柴萍萍
导师: 李里特,江正强
关键词: 甘露聚糖酶,枯草芽孢杆菌,发酵条件,纯化与性质,魔芋粉
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文研究了通过筛选得到的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WY45产甘露聚糖酶的发酵条件,并对其所产甘露聚糖酶进行了分离纯化,同时对纯酶的酶学性质进行了研究。主要结果有: 1.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WY45液体发酵产生甘露聚糖酶,发酵培养基经优化后,在4%的魔芋精粉为碳源,1.33%的大豆蛋白胨为氮源,初始pH5.5,50℃培养96 h的条件下,该菌产酶的酶活从初始的204 u/ml提高到2800 u/ml,优化提高了13.7倍,优化效果明显,且该酶活水平为现在已报道的同类酶中的最高水平。 2.枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WY45产甘露聚糖酶经60-90%硫酸铵沉淀,S-100凝胶过滤层析,OSFF离子交换层析等分离纯化步骤后得到电泳纯的纯酶,最终纯化倍数为6.08,酶活回收率为19.80%,经SDS-PAGE电泳测定该酶的分子量为44.47KDa。 3.pH对该甘露聚糖酶活力的影响很大。该酶的最适反应pH为6.0,在5.5-6.5的范围内,酶的相对活力都在80%以上;当pH低于5.0和高于9.0时,活力显著下降。在40℃下,酶在所采用的pH5.0-11.0的范围内都很稳定。该酶的最适反应温度为65℃,大于65℃酶活力即迅速下降,70℃时酶活力水平已低于15%。大多数金属阳离子对该酶活力有提高的作用,特别是Co2+和Ni+。
论文目录:
第一章 绪论
1.1 研究的目的和意义
1.1.1 研究意义
1.1.2 β—甘露聚糖酶的应用
1.2 甘露聚糖及甘露聚糖酶的研究进展
1.2.1 国外的研究进展
1.2.2 国内的研究进展
1.2.3 不同来源甘露聚糖酶主要性质比较
1.3 本课题研究的内容和目标
第二章 枯草芽孢杆菌WY45产β—甘露聚糖酶发酵条件研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 菌株
2.2.2 主要仪器设备
2.2.3 主要试剂
2.2.4 实验方法
2.3 结果与讨论
2.3.1 不同碳源对酶活力的影响
2.3.2 不同氮源和碳氮比对酶活力的影响
2.3.3 初始pH对酶活力的影
2.3.4 发酵培养温度对酶活力的影响
2.3.5 产酶历程
2.4 小结
第三章 甘露聚糖酶的纯化
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 主要仪器
3.2.2 主要试剂
3.2.3 甘露聚糖酶粗酶液的制备
3.2.4 硫酸铵分级沉淀
3.2.5 凝胶柱过滤层析
3.2.6 离子柱交换层析
3.2.7 甘露聚糖酶活力的测定
3.2.8 蛋白质含量测定
3.3 结果与讨论
3.3.1 硫酸铵分级沉淀
3.3.2 凝聚过滤柱层析
3.3.3 离子交换柱层析
3.3.4 SDS-PAGE鉴定酶的纯度及测定酶的分子量
3.4 小结
第四章 甘露聚糖酶的酶学性质
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 主要试剂和仪器
4.2.2 蛋白质的定量方法
4.2.3 酶活力的标准测定方法
4.2.4 最适pH和pH稳定性
4.2.5 最适温度和温度稳定性
4.2.6 金属离子和螯合剂(EDTA)对酶活力的影响
4.2.7 底物特异性的测定
4.2.8 酶解条件及酶解产物分析方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 最适pH和pH稳定性
4.3.2 最适温度和温度稳定性
4.3.3 金属离子和螯合剂(EDTA)对酶活力的影响
4.3.4 甘露聚糖酶的底物特异性
4.3.5 甘露聚糖酶解特性
4.4 小结
第五章 结论与建议
5.1 本研究的主要结论
5.2 建议
参考文献
致谢
个人简介
发布时间: 2005-07-22
参考文献
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