EPA、DHA对脂多糖刺激大鼠系膜细胞的影响

论文摘要

目的通过制备脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致大鼠肾小球系膜细胞（glomerularmesangial cells,GMCs）损伤模型,研究二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）、二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）对GMCs的增殖、凋亡以及炎症反应的影响,探讨其可能的作用机制。方法与结果1.EPA、DHA对正常GMCs增殖的影响体外培养小鼠GMCs,MTT法观察药物对其增殖的影响:取第3代细胞计数后按5×103/孔转种于96孔板,然后分为:正常对照组;EPA(10-2mmol·L-1、10-1mmol·L-1)组;DHA(10-2mmol·L-1、10-1mmol·L-1)组;分别培养24h、48h、72h后,MTT法检测细胞增殖情况及药物对细胞增殖的影响。结果显示,在37℃培养条件下,用药组和正常组细胞增殖无明显差异。2.EPA、DHA对LPS刺激的GMCs增殖的影响取第3代细胞进行实验,然后分为:正常对照组;LPS组(10%FCS,LPS终浓度为10μg·mL-1);EPA(10-2mmol·L-1、10-1mmol·L-1)组;DHA(10-2mmol·L-1、10-1mmol·L-1)组;分别培养24h、48h、72h后,MTT法检测细胞增殖情况及药物对细胞增殖的影响。结果显示,在37℃培养条件下,和正常组相比LPS组细胞增殖增强（P＜0.01）,EPA、DHA各浓度组均能抑制GMCs的过度增殖且呈剂量依赖性（P＜0.01.P＜0.01）。3.EPA、DHA对LPS刺激GMCs凋亡的影响根据凋亡试剂盒测试LPS处理组与空白对照组相比,凋亡率显著减少,10-1mmol·L-1的EPA和DHA处理组与LPS组相比,凋亡率分别增加3.32%、9.01%。4.EPA、DHA对正常GMCs抗氧化系统的影响SOD、MDA、GSH-PX的检测均依照试剂盒说明检测。结果显示在各个时间点,用药组SOD、MDA、GSH-PX活性与正常组无明显差异。5.EPA、DHA对LPS刺激GMCs抗氧化系统的影响SOD、MDA、GSH-PX的检测均依照试剂盒说明检测。结果显示在各个时间点,LPS组SOD活性明显低于对照组（P＜0.01,P＜0.05）,加EPA、DHA后,SOD活性明显升高（P＜0.01）;LPS组MDA含量明显高于对照组（P＜0.01,P＜0.05）;加入EPA、DHA后,MDA含量明显下降（P＜0.01,P＜0.05）;LPS组GSH-PX活性明显低于对照组（P＜0.05）;加EPA、DHA后,GSH-PX活性明显升高（P＜0.01,P＜0.05）。6.免疫组化法检测EPA、DHA对LPS刺激GMCs单核细胞趋化蛋白-1（monocle chemoattractant protein-1,MCP-1）的影响免疫组化结果显示,LPS刺激GMCs 48h使细胞分泌MCP-1增加。正常组细胞的胞浆区几乎没有染色,LPS组的细胞则可见明显的黄染。用药组均能使MCP-1减少。7.免疫组化法检测EPA、DHA对LPS刺激GMCs转化生长因子-β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）的影响免疫组化结果显示,LPS刺激GMCs48h使细胞分泌TGF-β1增加。正常组细胞的胞浆区几乎没有染色,LPS组的细胞则可见明显的黄染。用药组均能使TGF-β1减少。结论1.EPA和DHA能抑制GMCs的过度增殖并促进其凋亡。2.EPA和DHA能减轻自由基和炎症反应对GMCs的损伤作用。3.EPA和DHA可以降低LPS诱导的TGF-β1与MCP-1的表达。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 材料方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表