论文摘要
对生精细胞特异表达基因的功能界定将有利于揭示生精过程的生物学机理。由于体外细胞学研究方式的困难,研究者们积极地探索着体内基因转染方法。然而以往大部分的基因转染方法都倾向于转染Sertoli细胞而非生精细胞。多聚乙酰亚胺（polyethylenimine,PEI）是新近发现的一种非病毒阳离子转染介导剂,本研究探索了一个新的简便而有效的体内基因转染方法:PEI介导的在体睾丸基因转染。许多研究表明PEI有着比传统的脂质体更好的转染特性,并且已被广泛应用于许多研究中,但还未在睾丸组织的转基因研究中被研究过。本研究通过活体小鼠睾九输出管注射技术将PEI/DNA（pEGFP-NYD-SP12或pEGFP质粒）复合物导入生精小管,三天后冰冻切片,立即在荧光镜下观察绿色荧光蛋白的表达,判断转染状况。结果表明目的基因通过PEI的介导可以实现生精细胞的转染,而Sertoli细胞无明显被转染迹象,且被转染细胞大多为精母细胞。对于Sertoli细胞的阴性转染结果,可能是由于Sertoli未被转染或转染后基因表达效率很低,没有被检测到,这还需进一步的实验去验证。将本研究前期克隆的新基因NYD-SP12通过以上方式转入生精细胞。NYD-SP12基因是睾九特异表达基因,小鼠中原位杂交实验表明其表达只限于生精上皮而不在间质细胞中表达。在前期的体外细胞学实验中证明NYS-SP12基因定位于高尔基体,因此我们推断该基因可能参与了精子顶体的形成。本实验