蛇床子素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响

论文摘要

目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的体外培养体系,观察大鼠MSCs生物学特性,同时研究蛇床子素对体外培养的MSCs增殖和骨向分化的影响,以及在诱导过程中向成骨细胞（OB）分化相关的蛋白BMP-2mRNA的影响,从干细胞角度探讨蛇床子素防治OP的可能作用机制。方法:1.运用全骨髓贴壁法分离培养鉴定SD大鼠的MSCs。2.用MTT法检测不同浓度蛇床子素对MSCs增殖的影响,了解量效关系。3.用改良钙钴法对加入蛇床子素诱导后的细胞进行检测碱性磷酸酶（ALP）染色,确定蛇床子素是否具有成骨诱导作用,并通过ALP阳性细胞计数,确定最佳蛇床子素添加浓度。4.用最佳促骨向分化浓度的蛇床子素诱导MSCs向OB分化,分蛇床子素组、空白组、经典诱导组、蛇床子素和经典诱导液协同作用组四组,检测ALP活性和矿化结节数目。5.运用RT-PCR的方法检测成骨诱导分化过程中各组与OB分化相关信号蛋白BMP-2mRNA的影响,分组同上。结果:1.MSCs分离后24 h基本贴壁,10-12d达到融合,经过成骨、成脂诱导培养,MSCs分别表现出成骨细胞、脂肪细胞:流式细胞仪检测分离到的SD大鼠MSCs表面标志抗原CD44、CD29表达阳性;CD45及CD34表达为阴性。2.经MTT法检测蛇床子素对MSCs增殖的作用,蛇床子素浓度在1×10-5mol/L,1×10-6mol/L,1×10-7mol/L有明显促进MSCs增殖的作用,与空白组相比较有显著差异（P＜0.05）,其中以10-6mol/L效果最好。3.ALP染色阳性表达率结果显示:与空白组比较蛇床子素在1×10-6mol/L具有统计学意义（P＜0.05）,1×10-4mol/L,1×10-5mol/L,1×10-6mol/L,1×10-7mol/L无统计学意义。（P＞0.05）4.细胞培养12d后,蛇床子素干预组培养液中的ALP活性与空白组之间差异有显著性（P＜0.05）,而经典诱导组与协同组组间无显著性差异（P＞0.05）。5.细胞培养21d后,矿化结节计数结果显示:蛇床子素干预组、空白组之间差异有显著性（P＜0.05）,而经典诱导组与协同组、蛇床子素组之间均无显著性差异（P＞0.05）。6.蛇床子素对干预体系中BMP-2mRNA的表达有上调作用,BMP-2 mRNA的表达,蛇床子素干预组与空白组之间有显著性差异（P＜0.05）,经典诱导组与协同组之间无显著性差异（P＞0.05）。结论:1.采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠MSCs。2.1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L的蛇床子素具有促进MSCs增殖的作用。3.1×10-6mol/L蛇床子素具有诱导MSCs向OB分化,并能提高反映OB功能的ALP活性和矿化节结数目。4.1×10-6mol/L蛇床子素可以上调BMP-2mRNA的表达,提示蛇床子素诱导MSCs骨向分化的可能作用机制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 前言
• 1.骨质疏松症
• 2.MSCs的生物学特性
• 3.影响MSCs骨向分化的因素
• 4.MSCs与骨质疏松症
• 5.蛇床子素的研究现状
• 6.本课题研究思路及目的
• 实验一 MSCs的分离、培养、纯化和鉴定
• 1.研究目的
• 2.实验材料
• 3.实验方法
• 4.结果
• 5.讨论
• 6 结论
• 实验二:蛇床子素对MSCs增殖及骨向分化的影响
• 1.研究目的
• 2.实验材料
• 3.实验方法
• 4.结果
• 5.讨论
• 6 小结
• 实验三:蛇床子素对BMP-2mRNA的影响
• 1.研究目的
• 2.实验材料
• 3.实验方法
• 4.结果
• 5.讨论
• 6 小结
• 结论
• 展望
• 英文缩写英文全称中文名称
• 参考文献
• 附图
• 附录
• 致谢