基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱在食源性致病菌检测和鉴定分型中的应用研究

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱在食源性致病菌检测和鉴定分型中的应用研究

论文摘要

目的:探索并优化MALDI-TOF-MS检测与鉴定常见食源性致病细菌的实验条件,并用优化的实验条件对从门诊腹泻病人粪便中分离的88株沙门菌进行检测分型,同时对丝状真菌蛋白质组学研究实验条件进行优化。方法:对MALDI-TOF-MS检测食源性致病细菌所用培养基成分和状态、细菌前处理方法、菌株的新鲜度等影响因素进行考察,获得优化的实验条件,并对方法的重现性进行研究。用优化出的实验条件对沙门菌进行检测和鉴定分型分析,并与血清学分型、耐药分型和PFGE分型结果进行比较。结果:常见食源性病原细菌使用疱肉培养基37±1℃培养24h后,乙醇/甲酸提取法处理新鲜菌落后点靶上样,经MALDI-TOF-MS分析后其质谱图与质谱库中标准菌株的谱图进行比较进行菌株的鉴定。利用MALDI-TOF-MS对门诊腹泻病人临床分离88株沙门菌进行了分型,结果显示,在反映亲缘关系的差异水平值为100时,88株沙门菌被分为15个MALDI-TOF-MS型别。MALDI-TOF-MS分型结合耐药表型分型,可以将88株沙门菌分成44个亚型;MALDI-TOF-MS分型结合血清学分型,可以将88株菌分成46个亚型。MALDI-TOF-MS分型结合PFGE分型,可以将88株菌分成64个亚型。说明MALDI-TOF-MS在沙门菌分型中具有很好的分型能力,可在食源性病原菌溯源中发挥作用。本研究优化出冻干研磨机械破碎法提取真菌线粒体蛋白并使用Invitrogen Quant-iT快速蛋白定量测试盒对蛋白进行定量。黄曲霉和寄生曲霉产毒与非产毒株双向电泳分析结果显示,黄曲霉和寄生曲霉之间、黄曲霉产毒株与非产毒株之间、寄生曲霉产毒株与非产毒株之间线粒体蛋白成分差异较大。这些差异蛋白可能是区别曲霉属中不同种、同一种内产毒与非产毒菌株的标志蛋白。结论:MALDI-TOF-MS在检测与鉴定食源性病原菌中具有方法稳定、重复性好的特点,可成为食源性致病细菌分析鉴定的重要工具。线粒体差异蛋白可能是同一属内不同属种、同一种不同菌株间特性不同的基础。

论文目录

  • 中英文缩略词表
  • 菌种中文、拉丁文对照表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 第一部分 细菌MALDI-TOF-MS检测条件的优化
  • 材料与仪器
  • 实验方法
  • 第二部分 MALDI-TOF-MS在沙门菌分型研究中的应用
  • 材料与仪器
  • 实验方法
  • 实验结果
  • 第三部分 真菌蛋白质组学研究实验条件优化
  • 材料与仪器
  • 实验方法
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 综述
  • 相关论文文献

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