论文摘要
研究背景与总体思路卵巢癌一经发现,约70%即为晚期,因而其五年生存率始终徘徊在25%-30%,死亡率高居妇科恶性肿瘤之首。患者一经诊断,精神、心理压力增大,直接影响到临床治疗和预后。近年来,随着医学模式从单一的生物医学向生物—心理—社会模式的转换,心理社会因素对肿瘤患者的影响越来越受到国内外学者的广泛关注,但其作用机制尚不明瞭。目前,心理干预和免疫治疗已成为肿瘤综合治疗的重要内容,但其疗效尚未达成共识。因此,深入研究心理与肿瘤发生、发展的关系,利用心理治疗来阻止肿瘤的发生、发展,或者通过改变肿瘤患者的免疫状态来控制肿瘤,已越来越成为医学研究所关注的重点。但由于人的心理因素的多样性,难以统一控制,采用应激动物模型来研究心理因素对肿瘤的影响,有利于统一标准,重复性好,可控制性强,观察周期短,有望获得理想的结果。该课题分两部分进行:（1）通过建立人卵巢癌荷瘤裸鼠模型,研究不良心理应激与卵巢肿瘤免疫的关系,探讨不良心理应激在荷瘤裸鼠肿瘤发生、发展中的作用,最终为临床上对卵巢癌患者进行心理和免疫治疗提供实验依据;（2）采用临床心理评定量表,以现场调查问卷方式,了解妇科恶性肿瘤患者的社会心理特点和心身健康状况,从临床角度进一步研究不良心理因素与妇科恶性肿瘤发生的关系。第一部分:不良心理应激对人卵巢上皮性癌发生、发展影响的实验研究目的:利用人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠建立卵巢癌不良心理应激模型,对荷瘤裸鼠给予顺铂（DDP）进行治疗,观察在化疗和非化疗两种状态下,不良心理应激对人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠移植瘤生长体积、瘤体重量、移植瘤组织中p53、NFκBp65蛋白的表达及荷瘤裸鼠神经内分泌和免疫功能的影响,探讨不良心理应激在人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠肿瘤发生、发展中的作用,为临床上对卵巢癌患者进行心理和免疫治疗提供实验依据。方法:1、采用人卵巢上皮性癌组织建立裸鼠皮下移植瘤模型,并进行鼠间传代移植。观察皮下瘤生长情况。待肿瘤直径达0.8cm～1cm时,将其切下剪成直径1mm～2mm小块,再接种至另一裸鼠皮下进行传代。肿瘤均行病理组织学检查;将肿块制成单细胞悬液,体外培养并观察染色体特征。本实验采用稳定传代四次的裸鼠皮下移植瘤进行研究。2、采用束缚法建立不良心理应激模型,操作时依次将应激组裸鼠放入50ml离心管中（打孔3mm,通风良好）,不挤压动物尾巴,放入管内动物可前后活动,8h后将动物放出,恢复自由供食物和水,每天束缚应激8h（10:00AM-6:00PM）,5d/周（防止适应）,共2周。实验结束后第二天,眼眶取血,处死裸鼠,剥除瘤体称重,并做检测。3、实验共分6组（1）正常生长组（阴性对照组）:腹腔注射生理盐水（NS）;（2）正常生长+应激组（阳性对照）:腹腔注射NS,给予束缚应激;（3）荷瘤组（荷瘤阴性对照组）:腹腔注射NS;（4）荷瘤治疗组（荷瘤阳性对照组）:腹腔注射顺铂（DDP）;（5）荷瘤+应激组（实验组）:腹腔注射NS,给予束缚应激;（6）荷瘤治疗+应激组（实验组）:腹腔注射DDP,给予束缚应激; （1）～（2）组无肿瘤,（3）～（6）组是肿瘤组。（1）、（2）、（3）和（5）组给予生理盐水（NS）0.2ml/20g,（4）和（6）组给予顺铂（DDP）3mg/kg,0.2ml/20g（将顺铂配制成0.3mg/ml的注射液）。每3d腹腔注射1次,共注射4次。4、观察各组裸鼠生存状态、体重、肿瘤生长情况（肿瘤体积、瘤重及抑瘤率）及肿瘤组织形态学变化。5、Western Blotting检测各组肿瘤组织中p53、NFκBp65蛋白的表达。6、ELISA方法检测各组裸鼠血清中的皮质酮（CORT）、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,MTT方法检测各组裸鼠脾组织中NK细胞的活性。结果:1、成功建立了人卵巢上皮性癌组织裸鼠皮下移植瘤模型,鼠间传代移植成功率100%,接种瘤块后第5天左右,各组小鼠开始出现可触摸的瘤结节,在肿瘤接种后第12天开始增长迅速。观察到肿瘤在裸鼠体内的肝、脾转移行为。HE染色观察显示人卵巢浆液性腺癌的形态学特点,符合低分化浆液性腺癌（上皮性癌）,肝、脾组织均符合转移性浆液性腺癌改变。具有人肿瘤染色体特点。在此基础上,采用束缚方法成功建立了卵巢癌荷瘤裸鼠不良心理应激模型。2、各组裸鼠体重和瘤体重量的比较。（1）不良心理应激组整体生长状态不良,进食及活动不佳,荷瘤治疗+应激组生长状态最差。（2）正常生长+应激组、荷瘤+应激组、荷瘤治疗+应激组实验后体重均低于相对应的无应激组,差异有显著性（P﹤0.05）,说明不良应激使体重明显下降;荷瘤治疗组实验后体重低于荷瘤组,差异有显著性（P﹤0.05）,说明化疗使体重明显下降。（3）荷瘤+应激组与荷瘤治疗+应激组瘤体重量均大于相对应的无应激组,差异有显著性（P﹤0.05）;荷瘤治疗组瘤重小于荷瘤组,差异有显著性（P﹤0.05）;荷瘤治疗+应激组瘤重小于荷瘤组,但差异无显著性（P>0.05）。3、荷瘤裸鼠瘤组织中癌蛋白表达的比较。（1）荷瘤+应激组p53、NFκBp65的表达均大于荷瘤组、荷瘤治疗组,差异均有显著性（P﹤0.05）; （2）荷瘤治疗组p53、NFκBp65的表达小于荷瘤组,差异有显著性（P﹤0.05）;（3）四组比较,p53、NFκBp65在荷瘤+应激组表达最强,其次为荷瘤治疗+应激组和荷瘤组,荷瘤治疗组表达最弱。4、各组裸鼠血清中神经内分泌激素（CORT、NE、5-HT）值的比较。（1）正常生长+应激组、荷瘤+应激组与荷瘤治疗+应激组CORT和NE的值均大于相对应的无应激组,差异有显著性（P﹤0.05）。正常生长+应激组5-HT的值大于正常生长组,荷瘤+应激组5-HT的值大于荷瘤组,但差异均无显著性（P >0.05）;荷瘤治疗+应激组5-HT的值小于荷瘤治疗组,差异有显著性（P﹤0.05）;（2）荷瘤组CORT、NE和5-HT的值均大于正常生长组,差异有显著性（P﹤0.05）;（3）荷瘤治疗组CORT、NE和5-HT的值均大于荷瘤组,差异有显著性（P﹤0.05）;（4）荷瘤治疗+应激组CORT的值大于荷瘤组,NE和5-HT的值小于荷瘤组,差异均有显著性（P﹤0.05）。5、各组裸鼠血清中免疫功能指标（TNF-α、IL-6、IL-2、NK活性）值的比较。（1）正常生长+应激组、荷瘤+应激组与荷瘤治疗+应激组TNF-α和IL-6的值均大于各对应的无应激组, IL-2和NK活性的值均小于各对应的无应激组,差异有显著性（P﹤0.05）;（2）荷瘤组TNF-α和IL-6的值均大于正常生长组,IL-2和NK活性的值均小于正常生长组,差异均有显著性（P﹤0.05）;（3）荷瘤治疗组TNF-α、IL-6和NK活性均小于荷瘤组,差异有显著性（P﹤0.05）;IL-2的值小于荷瘤组,但差异无显著性（P>0.05）（4）荷瘤+应激组TNF-α和IL-6的值均大于正常生长+应激组,IL-2和NK活性的值均小于正常生长+应激组,差异均有显著性（P﹤0.05）。结论:1、采用束缚方法成功建立了不良心理应激模型。2、不良心理应激可导致人卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤的重量明显增加。顺铂化疗可导致移植瘤生长抑制,但同时给予不良心理应激,可促使肿瘤细胞生长加速,导致肿瘤的重量增加,明显降低化疗效果。3、不良心理应激可导致人卵巢癌荷瘤裸鼠p53、NFκBp65的蛋白表达增强。顺铂化疗可导致两者表达减弱,说明化疗有效,但是若此时给予不良心理应激,两者表达反而出现增强,甚至其增加水平超过未治疗状态。说明不良心理应激可通过增强p53、NFκBp65蛋白的表达,降低化疗效果,导致肿瘤细胞生长加速。4、不良心理应激通过下丘脑-垂体-肾上腺轴的激活,导致荷瘤裸鼠神经内分泌功能失调,皮质酮、去甲肾上腺素过量合成,5-羟色胺分泌紊乱,从而通过中枢神经系统的介导,破坏大脑情绪调节中枢正常功能的表达,降低机体的免疫功能。在化疗状态下,不良心理应激导致神经内分泌功能失调更加严重。5、不良心理应激可导致卵巢癌荷瘤裸鼠血清中的TNF-α和IL-6值明显升高, NK活性及IL-2值明显降低,说明不良心理应激可影响荷瘤裸鼠的免疫功能。顺铂化疗可导致其血清中的TNF-α值、IL-6值及NK活性显著降低,说明顺铂化疗可降低荷瘤裸鼠的免疫功能。在化疗状态下,不良心理应激会导致其免疫功能进一步下降,从而导致肿瘤细胞生长加速。第二部分:妇科恶性肿瘤患者心理状况及相关因素分析目的:研究妇科恶性肿瘤患者的社会心理特点和心身健康状况。方法:采用临床心理评定量表中的生活事件量表（LES）和90项心理症状核查表（SCL-90）,对60例妇科恶性肿瘤患者遭遇的生活事件和心身健康状况进行问卷调查,与同期住院的良性肿瘤者和健康者各40例相比较。结果:1、恶性肿瘤组病前遭遇到的生活事件总频数及紧张值、负性生活事件的频数及紧张值均高于良性肿瘤组和健康对照组,差异有显著性（P﹤0.05）,正性生活事件频数及紧张值无显著性变化。良性肿瘤组与健康对照组比较,生活事件总频数及负性事件频数高于健康对照组,差异有显著性（P﹤0.05）,正性事件频数、精神紧张总值及正性精神紧张值,两组比较,差异无显著性。2、恶性肿瘤组SCL-90各项指标,阳性项目均分及其他因子分与健康对照组、良性肿瘤组无差异（P>0.05）,躯体化、强迫、人际关系敏感、焦虑、敌对、恐怖、偏执、精神病性等均高于健康对照组和良性对照组,差异有显著性（P﹤0.05）。良性肿瘤组阳性项目均分及抑郁分高于健康对照组,差异有显著性（P﹤0.05）,躯体化、强迫、人际关系敏感、焦虑、敌对、恐怖、偏执、精神病性与其他因子分等与健康对照组,差异无显著性（P>0.05）。结论:不良心理社会因素与妇科恶性肿瘤的发生密切相关,对妇科肿瘤患者应采取积极的社会心理干预措施。
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