论文摘要
斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV）属NPV科A亚群。国内于1972年在广州地区首次从野外死亡的斜纹夜蛾虫体分离到这种病毒。其宿主斜纹夜蛾（Spodoptera litura,Spli）是鳞翅目夜蛾科的杂食性害虫,分布范围广,是我国粮棉、油等经济作物和蔬菜的重要害虫之一。应用SpltMNPV防治斜纹夜蛾是一种有效的生物防治方法,而通过基因工程手段构建新的高效杀虫病毒是改良生物病毒杀虫剂的重要途径。从分子水平深入地阐明SpltMNPV在体内的侵染、增殖规律、建立SpltMNPV载体表达系统是达到上述目的的理论基础和技术准备。因此,近年来对SpltMNPV的研究受到广泛关注,有关该病毒的序列测定、基因结构、功能和表达调控等分子生物学研究工作进展迅速,特别是对一些重要基因的结构分析,有助于筛选毒力较强的杀虫毒株,并为这一病毒杀虫剂的改良和发展以及组建昆虫杆状病毒表达载体奠定基础。本研究在Spli-SpltMNPV的模型中对ph及gp41基因进行了初步的研究,并尝试构建了新型的带有绿色荧光蛋白标记的转移载体,主要工作及成果如下: 1、克隆了SpltMNPV日本株A、B、C三种基因型的的多角体蛋白基因（polyhedrin,ph）,该基因大小为747bp,根据其推导的氨基酸序列为249aa（GenBank登录号,A型:AY552474,B型:AY549963,C型:AY549964）。 2、克隆并表达了SpltMNPV日本C3株gp41基因,该基因编码区含993bp核苷酸,编码分子量为36.9kD的多肽（GenBank登陆号:AY605063）。分析了该基因的核苷酸和氨基酸序列特征,进行了GP41蛋白的二级结构预测以及gp41和ph的分子系统发育分析。将gp41基因克隆至原核表达载体pET28a（+）,经IVIG诱导,SDS-PAGE显示该蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中获得了表达。 3、进行了构建以GFP为标记基因的斜纹夜蛾核型多角体病毒载体系统的尝试。使用SpltMNPV ph启动子,以绿色荧光蛋白（GFP）基因为标记基因,构建新型转移载体pSplt-gfp。将pSplt-gfp与野生型SpltMNPV DNA共转染Spli细胞,通过同源
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