论文摘要
为了解决天然牛黄药源不足的问题,上世纪70年代中期国内一些单位开始了牛体内培植牛黄的研究并取得了成功。国内的一些科研工作者开展了模拟胆囊培植牛黄的技术研究,使培植牛黄的产量和质量都有了较大的提高。即使如此,由于对培植牛黄形成机理了解较浅,使培植牛黄技术仍存在一些难以解决的问题。本研究动态观察了牛黄成核及核生长的规律,检测了胆汁中一些主要成分在牛黄形成过程中的变化。向胆汁中添加钙结合蛋白（CaBP）,并检测胆汁中相关指标的变化,以探讨钙结合蛋白对牛黄形成的影响。利用牛胆汁驯化大肠杆菌（O8）,得到耐胆汁大肠杆菌。驯化后的大肠杆菌其发酵尿素、氨基酸和葡磷栋水产生的生化特性发生变化。将耐胆汁大肠杆菌添加到胆汁中进行牛黄培植,测得牛黄成核时间为3.7±0.2h,牛黄核的最高数量为5535±267个/mm3,且在不同的时间其数量的变化差异极显著（p﹤0.01）;牛黄核可视面积达到高峰时为56.8±4.3μm2;总蛋白、Ca2+和总胆红素的浓度均出现先降低后升高而后再降低的变化,且总蛋白和Ca2+的浓度随时间的延长变化显著（p﹤0.05）,而总胆红素浓度的变化差异不显著（p﹥0.05）。通过对胆汁中蛋白质的电泳分析,得到了分子量为65KD、58 KD、51 KD、35.5 KD、15.6 KD和6.6KD的六条较清晰的蛋白质条带和一些含量较低的不清晰的蛋白质条带。通过对CaBP进行纯化和电泳分析,证明CaBP分子量为6.6KD,含量为0.15mg/ml,且具有与色素和脂质结合的特性。在成核胆汁中添加大于10%CaBP,成核时间明显缩短（p﹤0.05）,Ca2+浓度和总蛋白的浓度变化差异显著（p﹤0.05）,但总胆红素的变化不显著（p﹥0.05）。用人工胆囊培植牛黄,利用家兔制备大肠杆菌和CaBP的抗体。用试管凝集法测得大肠杆菌抗血清的效价为1:5120,用间接竞争ELISA法测得CaBP的抗体的效价为1:51200。对牛黄中的大肠杆菌和CaBP进行间接免疫荧光法染色。结果表明,大肠杆菌和CaBP不仅参与牛黄的形成,而且在牛黄核之间起桥梁和纽带的作用。