植物乳杆菌细胞壁肽聚糖微胶囊化及体内缓释效果评价

论文摘要

本论文将东北酸菜中筛选出的植物乳杆菌作为试验菌株,采用改良的三氯乙酸法从该菌株中分离提取肽聚糖,并对肽聚糖提取物进行了结构鉴定及理化分析。以壳聚糖为壁材将提取的肽聚糖进行微球化,并通过动物实验研究口服微球化的肽聚糖的缓释效果。试验主要过程及结果如下：(1)通过改良的三氯乙酸法提取肽聚糖,其得率为15.29±1.28%,其中总糖含量为39.10±1.95%,脂类含量为1.41±0.04%,蛋白质含量为58.00±2.16%,组成植物乳杆菌肽聚糖基本结构单元连接肽的四种氨基酸(丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸)含量明显高于菌粉中同种氨基酸含量；红外光谱分析显示提取物具有肽聚糖特征性结构。(2)采用乳化交联法制备载肽聚糖的壳聚糖微球,该工艺稳定,可重复性好,成球性良好,表面粗糙,微球的载药量和包封率依壁材和芯材的比例而变化,其中,质量比为1：2的复合微球平均载药量为29.10±3.84g/100g,包封率为91.00±3.15%,确定为最佳比例条件。(3)动物试验通过低、中、高三种剂量的裸肽聚糖、载肽聚糖的壳聚糖微球以及空白壳聚糖微球对小鼠进行灌胃处理,取血清,ELISA (?)去检测小鼠血清中溶菌酶含量。在免疫后第9d各载药微球组小鼠血清中溶菌酶含量均达到最高值,并且明显高于其他对照组,免疫后第15d各载药微球组血清中溶菌酶含量仍保持较高水平。载肽聚糖的壳聚糖微球具有显著的缓释效果,能够显著延长肽聚糖作用时间。本课题首次将肽聚糖进行微球化,并通过口服给药,该给药途径克服了传统注射给药途径带来的麻烦,将对肽聚糖作为免疫佐剂的进一步研究奠定基础,同时为新型口服疫苗的研制提供了参考。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 微生物多糖免疫作用
• 1.2 肽聚糖的研究进展
• 1.2.1 肽聚糖免疫活性研究进展
• 1.2.2 肽聚糖识别蛋白研究进展
• 1.3 植物乳杆菌的研究进展
• 1.3.1 植物乳杆菌概述
• 1.3.2 植物乳杆菌的生理功能
• 1.3.3 植物乳杆菌的应用现状
• 1.4 微胶囊简介
• 1.4.1 微胶囊技术与应用
• 1.4.2 药物的微胶囊化
• 1.4.3 壳聚糖微胶囊的制备方法
• 1.4.4 壳聚糖微胶囊应用
• 1.5 本课题研究的目的意义
• 第2章 植物乳杆菌细胞壁肽聚糖提取
• 2.1 实验试剂和仪器
• 2.1.1 供试菌种
• 2.1.2 主要溶液及培养基
• 2.1.3 实验试剂
• 2.1.4 实验仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 菌种活化及扩大培养
• 2.2.2 三氯乙酸法提取细胞壁肽聚糖
• 2.2.3 溶菌酶实验
• 2.2.4 氨基酸组分分析
• 2.2.5 肽聚糖总糖含量测定:苯酚—硫酸法
• 2.2.6 肽聚糖总脂含量测定:香草醛法
• 2.2.7 蛋白质含量测定
• 2.2.8 红外光谱分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 肽聚糖提取的得率
• 2.3.2 溶菌酶实验结果
• 2.3.3 氨基酸组分分析
• 2.3.4 肽聚糖总糖含量测定
• 2.3.5 肽聚糖总脂含量测定
• 2.3.6 蛋白质含量测定
• 2.3.7 红外光谱分析
• 2.4 小结
• 第3章 载肽聚糖的壳聚糖微球制备
• 3.1 实验试剂及仪器
• 3.1.1 实验材料及试剂
• 3.1.2 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 空白壳聚糖微球制备
• 3.2.2 载肽聚糖的壳聚糖微球制备
• 3.2.3 扫描电镜观察
• 3.2.4 红外光谱分析（FTIR）
• 3.2.5 热重（TG）分析
• 3.2.6 载药量和包封率检测
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 扫描电镜观察微球形态
• 3.3.2 红外光谱分析
• 3.3.3 热重分析
• 3.3.4 载药量包封率测定
• 3.4 小结
• 第4章 肽聚糖微球在体内缓释效果评价
• 4.1 实验试剂和仪器
• 4.1.1 实验材料及试剂
• 4.1.2 实验仪器
• 4.1.3 实验动物
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 小鼠免疫
• 4.2.2 血清溶菌酶含量测定
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 小鼠外部形态观察
• 4.3.2 血清溶菌酶含量测定
• 第5章 结论
• 第6章 本论文的主要创新点
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文及申请专利