大鼠颅脑损伤后nestin蛋白、PSD-95、SYP表达细胞形态学改变及钙离子通道变化研究

论文摘要

目的:应用大鼠颅脑外伤模型观察轻、中、重度损伤,不同时间窗额叶皮质、海马CA1区:nestin蛋白、PSD-95、SYP表达;电镜细胞形态学改变;钙离子通道变化。旨在研究上述变化与TBI发生发展的关系;探讨神经元再生和修复的理论基础。为丰富TBI发病机理、指导临床治疗、药物开发应用提供可信的理论依据。方法:将成年SD大鼠分为对照组、假手术组、损伤组。损伤组采取侧位液压冲击法应用不同压力制成轻、中、重颅脑损伤动物模型。于损伤后6h、12h、1d、3d、7d、14d采集标本。采用免疫组织化学技术,检测大鼠损伤额叶皮质、海马CA1区nestin蛋白、PSD-95、SYP表达;应用膜片钳技术研究大鼠颅脑损伤后钙离子通道变化;结果采用方差分析和q检验进行统计学分析。通过电镜观察大鼠颅脑损伤后细胞形态学改变。结果:①轻、中、重损伤各组nestin蛋白与SYP免疫阳性表达均明显高于同时间的对照组、假手术组,差异显著（p<0.05）;中、重度损伤组均高于轻度损伤组,差异显著（p<0.05）;重度损伤组高于中度损伤组,无显著差异（p>0.05）。中、重度组额叶皮质高于海马CA1区,差异显著（p<0.05）;轻度损伤组额叶皮质高于海马CA1区,无显著差异（p>0.05）。②中、重度损伤组PSD-95出现免疫活性表达明显低于同时间的对照组、假手术组,差异显著（p<0.05）;轻度损伤组低于对照组、假手术组,无显著差异（p>0.05）;中度损伤组、重度损伤组均低于轻度损伤组,差异显著（p<0.05）。重度损伤组低于中度损伤组,差异显著（p<0.05）;轻、中、重度损伤组额叶皮质均高于海马CA1区,无显著差异（p>0.05）。③电镜改变:TBI早期,细胞核增大,后出现核固缩、核溶解。线粒体肿胀、变大,后出现线粒体空化。粗面内质网扩张、肿胀、脱颗粒现象,后出现空泡样改变。细胞质从致密到空化样变化。④中、重度损伤组于6h在额叶皮质、海马CA1区钙离子通道开始出现开放概率、平均开放时间增强、12h增强明显;直至24h。平均关闭时间降低,12h降低明显;直至24h。中、重度损伤组开放概率、平均开放时间、平均关闭时间在6h后对比对照组、假手术组、轻度损伤组,均有显著性差异（p<0.05）。结论:①液压冲击大鼠TBI模型,是观察研究较为理性模型。②nestin蛋白与TBI程度呈正相关,7d内表达明显。说明nestin蛋白是TBI早期及损伤程度的标记物。③PSD-95与TBI程度呈负相关,1-2 w下降明显。提示PSD-95可能与认知功能障碍有关。④SYP与TBI程度呈正相关,12h开始,1w高峰,2w下降。说明SYP是TBI后神经系统修复的重要指标。⑤电镜显示TBI后神经细胞受损变化,损伤越重,变化越明显。⑥膜片钳技术记录钙离子开放概率、平均开放时间增加;平均关闭时间减少。显示TBI后有神经细胞钙超载,与TBI程度有相关性。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 1. 创伤性颅脑外伤的相关概况与研究进展
• 2. 颅脑外伤与nestin 蛋白
• 3. 颅脑外伤与突触蛋白
• 4. 颅脑外伤与突触后致密物质
• 第二部分 实验研究
• 第一章 大鼠颅脑损伤后nestin 蛋白、PSD-95、SYP 表达的研究
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 第二章 大鼠颅脑损伤后细胞形态学改变
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 第三章 应用膜片钳技术对大鼠颅脑损伤后钙离子通道的变化研究
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 本文结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士期间发表的论文及成果
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢