转基因烟草及番茄表达东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽的研究

论文摘要

蝎是传统的名贵中药材,其临床应用历史悠久,药用价值高,应用广泛。蝎毒是全蝎主要有效成份,有着重要的临床价值。镇痛抗肿瘤肽（Analgesic-antitumor peptide,AGAP）是从东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）蝎毒中提取的一种具有镇痛和抗肿瘤作用的活性肽,实验表明,在艾氏腹水瘤与S-180实体瘤两种移植性肿瘤模型中AGAP具有抗肿瘤活性,采用小鼠醋酸扭体和热板法实验表明,AGAP具有镇痛活性,由于其具有镇痛抗肿瘤的双重疗效,有望开发为高治疗指数的抗癌药物。本实验首先将AGAP基因克隆到质粒pBI121中,构建获得植物表达载体pBI-AGAP,经序列测定验证后,将重组质粒通过三亲交配法和液氮冻融法导入农杆菌（Agrobactriumtumefaciens）中,获得pBI-AGAP/LBA4404工程菌。随后通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草以及番茄的叶片外植体,在选择培养基上进行抗性筛选,经过分化、壮大、生根等不同条件培养基培育,获得烟草和番茄的抗性植株。利用PCR方法验证,初步证明AGAP基因已经整合进烟草和番茄的基因组。而后通过RT-PCR进一步验证AGAP基因已经在抗性植株细胞内进行转录。Western blotting分析结果表明转基因烟草和番茄均已成功表达AGAP蛋白。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 蝎与蝎毒
• 1.2 蝎毒的镇痛抗肿瘤活性研究
• 1.2.1 蝎毒的镇痛活性
• 1.2.2 蝎毒的抗肿瘤活性
• 1.3 转基因植物生产药用蛋白研究
• 1.3.1 转基因植物技术方法
• 1.3.2 转基因植物药物
• 1.3.3 转基因植物产药体系现存问题及解决办法
• 1.4 立题依据及实验目的
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 菌株
• 2.1.2 植物材料
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 模板与引物
• 2.1.5 培养基
• 2.1.6 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 植物表达载体pBI-AGAP的构建
• 2.2.2 转基因工程菌pBI-AGAP/LBA4404的获得
• 2.2.3 农杆菌叶盘法介导植物遗传转化
• 2.2.4 转基因烟草及番茄的鉴定
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 实验结果
• 3.1.1 植物表达载体pBI-AGAP的构建
• 3.1.2 工程菌pBI-AGAP/LBA4404的PCR验证
• 3.1.3 转化外植体抗性植株再生
• 3.1.4 转基因烟草及番茄的鉴定
• 3.2 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表文章
• 致谢