水牛CD14的克隆与表达

论文摘要

目的：本研究旨在克隆、表达水牛CD14基因,并对其蛋白进行纯化及Western Blot鉴定。方法：采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增得到水牛白细胞分化抗原14（Buffalo cluster of differentiation antigen14, bCD14）基因CDS区,构建pET28a—bCD14重组质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE,纯化得到目的蛋白后,进行Western blot分析。结果：克隆获得的bCD14基因包括一个含1122个bp的开放阅读框,编码373个氨基酸,IPTG诱导表达得到了携带组氨酸标签的bCD14融合蛋白。可溶性分析发现,融合蛋白主要以包涵体形式存在,用抗His单克隆抗体进行Western Blot检测,得到了一条约46KD的特异性抗体结合带,表明bCD14原核表达载体构建成功并表达。结论：本研究克隆、表达了bCD14,为进一步揭示水牛革兰氏阴性菌的感染机制奠定了坚实的基础。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写表
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 文献综述
• 1.1.1 CD14的结构
• 1.1.2 CD14的功能
• 1.1.3 CD14的作用机理
• 1.1.4 CD14的临床研究意义
• 1.1.5 与CD1相关的蛋白分子
• 1.2 本研究的目的与意义
• 第二章 水牛CD14 cDNA的克隆
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 PET28a-bCD14的克隆
• 2.2.2 水牛CD14的生物信息学分析
• 2.3 讨论
• 2.3.1 水牛外周血白细胞RNA的提取
• 2.3.2 bCD14的生物信息学分析
• 第三章 水牛CD14的表达
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 水牛CD14的原核表达
• 3.2.2 重组融合蛋白的可溶性分析
• 3.2.3 重组融合蛋白的Western blot分析
• 3.3 讨论
• 3.3.1 CD14的研究前景
• 3.3.2 重组融合蛋白的表达
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢