论文摘要
目的:观察苦参素(matrine, MAT)对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)(?)勺临床表现、脊髓组织病理学改变及发病过程中一氧化氮(nitric oxide, NO)/诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)系统的表达,白介素-17(interleukin-17,IL-17)/白介素-23(interleukin-23,IL-23)炎性轴的影响,初步探讨其对EAE的防治作用及可能的机制,为开发多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)新的治疗途径和方法提供有意义的基础实验依据。方法:1模型建立:应用豚鼠全脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate, GPSCH)+完全弗氏佐剂(complete freund adjuvant, CFA)制成的抗原乳剂,免疫Wistar大鼠建立EAE模型。免疫后每天观察大鼠的活动情况,测量体重、记录神经功能学评分。2实验动物分组及给药:将40只清洁级雌性Wistar大鼠随机分为4组——正常对照组(N)、EAE模型组(M)、MAT高剂量组(MAT-H)、MAT(?)低剂量组(MAT-L)。正常对照组和模型组自免疫当日每天一次腹腔注射6.7 mL·kg-1生理盐水注射液(normal saline, NS),连续注射16天;MAT高剂量组自免疫当日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1(200mg·kg-1)苦参素注射液,连续给药16天;MAT低剂量组自免疫当日每天一次腹腔注射6.7mL·kg-1(150mg·kg-1)苦参素注射液,连续给药16天。3样本采集:实验大鼠在免疫后第17天眼眶后静脉丛采血法取血,分离血清备用;并于心脏灌流后取脊髓腰膨大置于4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋、切片。4指标检测:苏木素-伊红(HE)和变色酸-2R-亮绿(C-2R-BG)染色观察脊髓组织病理学改变,硝酸酶还原法测定EAE大鼠血清中NO的表达,免疫组织化学法和RT-PCR法分别检测脊髓中iNOS及其1mRNA的表达,双抗夹心ELISA法检测血清中IL-17、IL-23的表达。结果:1大鼠发病率、体重和临床评分变化:正常组无动物发病;MAT-H组、MAT-L组动物发病率低于模型组(P<0.05);MAT-H组动物发病率低于MAT-L组发病率(P>0.05)。正常组动物在实验期间体重持续上升,MAT-H组、MAT-L组、模型组大鼠平均体重变化呈下降趋势;与模型组相比较,MAT-H组、MAT-L组的体重变化较小(P<0.05);MAT-H组与MAT-L组间体重变化差异无统计学意义(P>0.05)。与MAT-H组、MAT-L组动物比较,模型组的平均神经功能评分显著升高(P<0.05);MAT-H组与MAT-L组间神经功能学评分差异无统计学意义(P>0.05)。2组织病理学观察:正常组动物脊髓内无炎性细胞浸润与髓鞘脱失,模型组、MAT-H组、MAT-L组动物脊髓内均存在炎性细胞浸润与髓鞘脱失;与模型组相比,MAT-H组、MAT-L组大鼠脊髓炎性细胞浸润与髓鞘脱失有所减轻(P=0.01);MAT-H组炎症浸润细胞与髓鞘脱失比MAT-L组少(P>0.05)。3血清中NO含量的变化:与正常组比较,模型组、MAT-H组、MAT-L组大鼠血清NO表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,MAT-H组、MAT-L组大鼠血清NO表达水平降低(P<0.01);但MAT-H组与MAT-L组大鼠血清NO表达水平无显著差异(P>0.05)。4脊髓中iNOS及其mRNA的表达:与正常组比较,模型组、MAT-H组、MAT-L组大鼠脊髓iNOS及其mRNA表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,MAT-H组大鼠脊髓iNOS表达水平降低(P<0.01),脊髓中iNOSmRNA在MAT-H组、MAT-L组表达水平也降低(P<0.05);但MAT-H组与MAT-L组大鼠脊髓中iNOSmRNA表达水平无显著差异(P>0.05)。5血清中IL-17、IL-23的表达:与正常组比较,模型组、MAT-H组、MAT-L组大鼠血清IL-17、IL-23表达水平升高(P<0.01);与模型组相比,MAT-H组大鼠血清IL-17、IL-23表达水平降低(P<0.01),MAT-L组表达水平也降低(P<0.05);但MAT-H组与MAT-L组大鼠血清IL-17、IL-23表达水平无显著差异(P>0.05)。结论:MAT对由GPSCH+CFA制成的抗原乳剂诱导的Wistar大鼠EAE模型具有明显的防治作用,其作用机制可能是通过抑制大鼠血清和脊髓NO/iNOS系统的表达,下调血清中IL-17、IL-23的表达而抑制IL-17/IL-23炎性轴,从而起到对EAE的炎性调节作用而促进EAE临床症状缓解。
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