足三里化学性穴位注射对蜜蜂毒诱致的疼痛与炎症的作用机制研究

论文摘要

背景与目的:一般认为蜜蜂毒（bee venom,BV）是一种可以引起疼痛的物质,但是目前大量的研究已经证实蜜蜂毒作为化学物质进行穴位注射可显著的减轻多种原因所引起的剧烈疼痛和局部肿胀,而且认为这种镇痛及抗炎作用是蜜蜂毒所特有的。目前对于蜜蜂毒穴位注射所产生的镇痛和抗炎作用机制有一定的研究。许多实验[1,2]证明蜜蜂毒足三里穴位注射所产生的镇痛作用是由痛下行调节系统（descending modulatory systems）的激活来调节的。有趣的是,穴位注射的镇痛作用是通过α2-肾上腺素能受体起作用而不是通过阿片肽类受体起作用。我们目前的实验主要是探讨在蜜蜂毒疼痛模型中,足三里穴位注射化学刺激物如福尔马林、完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant ,CFA）等,是否会像蜜蜂毒一样,能够产生抗伤害作用及抗炎症作用,并进一步了解其可能的机制。首先,观察足三里穴位注射蜜蜂毒、福尔马林及CFA对大鼠足底皮下注射蜜蜂毒所诱致的持续性自发痛、机械性痛敏及注射部位的炎症性肿胀的影响。结果显示足三里注射蜜蜂毒、福尔马林及CFA等都会对足底皮下注射蜜蜂毒所诱致的持续性自发痛和机械性痛敏产生显著的抑制作用,但是对于足底皮下注射蜜蜂毒所诱致的炎症性肿胀几乎没有任何影响。为了进一步探讨足三里穴位注射蜜蜂毒引起的抗伤害作用可能的神经机制,我们又分别观察了预先给予腹腔注射纳洛酮（5 mg/kg）和足三里穴位注射0.15%辣椒素预处理对于蜜蜂毒足三里穴位注射引起的抗伤害作用的影响。材料和方法:应用蜜蜂毒（bee venom, BV）作为化学致痛剂足底皮下注射模型来研究足三里穴位注射化学物质在大鼠后肢足底皮下注射蜜蜂毒诱致的自发痛性反应、机械性痛敏和炎症反应中的作用。实验采用雄性SD大鼠,体重250～300克。实验计划设计如图1。在实验的第一阶段,在足底皮下注射蜜蜂毒前10分钟,分别给予化学刺激物（蜜蜂毒、福尔马林及CFA）足三里穴位注射,观察对于足底皮下注射蜜蜂毒诱致的持续性自发痛（persistent spontaneous nociception,PSN）、机械性痛敏及注射侧足爪的炎症性肿胀的影响（图1A）。在实验的第二阶段,分别给予足底皮下注射蜜蜂毒前10分钟前腹腔注射纳洛酮（5mg/kg, i.p.）或足底皮下注射蜜蜂毒前22-28小时给予足三里注射0.15%辣椒素预处理,目的是探讨内源性阿片肽受体及辣椒素敏感的初级传入纤维（capsaicin sensitive primary afferent,CSPA）在蜜蜂毒足三里穴位注射引起的抗伤害作用方面的效应（图1B）。既往的研究结果认为5mg/kg纳洛酮腹腔注射可以完全翻转内源性阿片肽受体的作用[3,4],且近来已有实验证明0.15%辣椒素可以毁损局部的辣椒素敏感的初级传入纤维[5]。分别经上述处理后,观察大鼠在1个小时内每5分钟自发性痛行为（缩足反射）的数量。同时,在蜜蜂毒足底皮下注射前及注射后4小时用von-Frey机械刺激纤维检测大鼠左侧后足足底鼠爪机械刺激反应阈值（ paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）以及应用YLS-7A足趾容积测量仪测量蜜蜂毒注射前及注射后4小时注射侧后肢鼠爪的足趾体积（paw volume,PV）。结果:与先前的研究结果[5,6]相一致,足底皮下注射蜜蜂毒会产生持续的自发的缩足反射,这种效应大约持续约1小时。在1个小时的观察时间内,相对于空白对照（单纯足底皮下注射BV）组,背部皮下注射蜜蜂毒处理组,足三里生理盐水注射组,同侧足三里蜜蜂毒注射组及对侧足三里蜜蜂毒注射组都会对足底皮下注射蜜蜂毒所诱致的持续性自发缩足反射（persistent spontaneous nociception, PSFR）产生显著的抑制作用。对于足底皮下注射蜜蜂毒诱致的持续性自发缩足反射,背部皮下注射福尔马林处理组与同侧足三里福尔马林注射组都产生显著的抑制作用,且同侧足三里福尔马林注射组产生更加显著的抑制作用。与足三里注射蜜蜂毒和福尔马林的结果不同,背部皮下注射CFA处理组在1小时的观察时间里,对足底皮下注射蜜蜂毒诱致的持续性自发缩足反射没有出现明显的抑制作用,但与空白对照（单纯足底皮下注射BV）组相比,同侧足三里注射CFA组产生显著的抑制作用。此外,同侧足三里注射CFA组比其他两处理组（足三里生理盐水注射组及背部皮下注射CFA处理组）对足底皮下注射蜜蜂毒诱致的持续性自发缩足反射产生了更加明显的抑制作用。我们的实验发现足底皮下注射蜜蜂毒会使注射处的缩爪机械反应阈值（PWMT）产生显著的下降,表明机械性痛敏的发生,这与先前的研究结果[5,6]相一致。相对于空白对照（单纯足底皮下注射BV）组,所有处理组（包括背部皮下注射BV处理组,足三里生理盐水注射组,以及同侧足三里BV注射组）均可明显抑制足底皮下注射蜜蜂毒诱致的PWMT下降。与足三里穴位注射蜜蜂毒的结果相似,福尔马林和CFA足三里穴位注射都对足底皮下注射蜜蜂毒诱致的PWMT下降产生明显的抑制。与其他处理组（足三里生理盐水注射或背部皮下注射福尔马林/CFA）相比,足三里注射福尔马林或CFA能够更加明显抑制足底皮下注射蜜蜂毒诱致的PWMT下降。然而,足三里注射蜜蜂毒、福尔马林及CFA对足底皮下注射蜜蜂毒诱致的的鼠爪肿胀均没有明显的作用。进一步,我们发现:纳洛酮预处理对于蜜蜂毒足三里穴位注射的抗伤害作用（即对足底皮下注射蜜蜂毒诱致的持续性自发痛和机械性痛敏的抑制作用）没有任何影响。而足三里预先注射辣椒素对于蜜蜂毒足三里穴位注射的抗持续自发痛作用有显著的翻转作用,但是对于蜜蜂毒足三里穴位注射产生的抗机械性痛敏的作用没有任何影响。结论:在蜜蜂毒疼痛模型中,足三里穴位注射化学刺激物质可产生抗伤害作用,但是没有抗炎症作用。这种化学刺激物质穴位注射的抗伤害作用是普遍的现象,而不是蜜蜂毒所特有的。此外,我们的实验结果还表明:在蜜蜂毒疼痛模型中,足三里穴位注射蜜蜂毒产生的抗伤害作用不是通过内源性阿片肽受体发挥作用,而可能部分通过辣椒素敏感的初级传入纤维所介导。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、缩略语表