论文摘要
目的：脂肪细胞的增殖和分化异常会引起脂肪组织过多堆积，导致能量代谢失衡，引起肥胖及与肥胖相关的一系列疾病。过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）是核受体超家族的成员，是一类转录因子，它的激活影响了脂肪分化通路；11β-羟化类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）是一种微粒体酶，主要功能是催化无活性的可的松为有活性的氢化可的松，糖皮质激素对细胞的增殖、分化、凋亡都有重要作用。我们用适当的条件将3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞，观察在分化过程中，PPARγ激动剂对脂肪细胞形态和标志基因表达的作用以及PPARγ激动剂和拮抗剂对11β-HSD1、GR表达的影响，探讨PPARγ激动剂对脂肪细胞分化影响可能存在的机理。方法：1、3T3-L1脂肪前体细胞生长接触至单层后，采用0.5mM IMX+2uM地塞米松+10ug／ml胰岛素诱导方案诱导其分化至一定天数，同时以PPARγ激动剂—吡格列酮对分化过程中的细胞进行刺激，采用油红O染色，在倒置显微镜下观察细胞形态、脂滴的形成；采用实时荧光定量PCR技术观察脂肪细胞分化标志基因如C／EBPα、LPL、FAS、aP2和GLUT4表达的变化。2、利用Western blot和实时荧光定量PCR技术，观察3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中11β-HSD1、GR表达的变化以及不同浓度PPARγ激动剂吡格列酮和拮抗剂Gw9662对11β-HSD1、GR表达的影响。结果：1、3T3-L1脂肪前体细胞贴壁后呈现梭形的成纤维细胞形态；到分化诱导至第四天时，脂肪细胞的脂滴出现并逐渐明显，到诱导分化第八天时，视野中大约80％的细胞均已经分化成为形态典型的成熟脂肪细胞，吡格列酮刺激组在分化至第四天已经大约有60％的细胞分化成熟，第八天则有约95％的细胞分化成熟。在3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中，有关脂肪细胞分化标志基因如C／EBPα、LPL、FAS、aP2和GLUT4，其表达均随着分化天数的增加明显上调（P＜0.01）。在PPARγ激动剂—吡格列酮刺激的3T3-L1细胞，这些基因的上调幅度大于未加刺激的正常3T3-L1组（P＜0.01）。2、11β-HSD1的表达随着3T3-L1脂肪前体细胞分化天数的增加而上升，加入吡格列酮刺激后其表达量下降；而加入GW9662刺激后，11β-HSD1的表达增加（P＜0.01）。GR的表达量尽管随着脂肪细胞分化天数的增加而上升，但其表达量较加入吡格列酮刺激时降低（P＜0.01）；加入GW9662刺激后，GR的表达下降（P＜0.05）。11β-HSD1的表达随着吡格列酮刺激浓度的增加和时间的延长而下降（P＜0.01），GR的表达则上升（P＜0.01）；相反，随着GW9662刺激浓度的增加和时间的延长（P＜0.01），11β-HSD1的表达逐渐上升，GR的表达则下降（P＜0.01）。结论：1、上述脂肪细胞诱导分化方案能使3T3-L1脂肪前体细胞有效分化，且分化均一，分化效率高，成熟时细胞大而圆，脂滴明显，部分可融合成较大的脂滴。PPARγ激动剂—吡格列酮对3T3-L1脂肪前体细胞的分化有促进作用。2、PPARγ激动剂—吡格列酮下调3T3-L1细胞中11β-HSD1的表达；PPARγ拮抗剂—GW9662则上调11β-HSD1的表达，这种作用呈浓度和时间依赖。GR的表达量变化则呈相反的趋势。PPARγ和11β-HSD1促进脂肪细胞分化的作用途径可能存在交叉，并且通过PPARγ和GR这两种核受体的相互作用实现。