论文摘要
[目的]骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC),也被称为骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells),是存在于骨髓基质中一种成体干细胞,来源于中胚层,具有很强的自我复制和多向分化功能,可以分化为多种不同的组织细胞,是细胞工程学和组织工程学研究中的一种理想种子细胞。如果BMSC容易接受外源性基因而且稳定表达,结合其多向分化能力,BMSC将会在组织工程、细胞移植、基因治疗等领域得到十分广阔的应用。本实验的主要目的为: 1.建立一种体外分离、培养扩增大鼠骨髓基质细胞的方法,为进一步研究和利用该细胞奠定基础; 2.研究脂质体转染法对骨髓基质细胞进行基因修饰的可行性和有效性,为研究骨髓基质细胞在组织工程和基因治疗中的应用提供。 [方法]用淋巴细胞分离液分离出大鼠骨髓基质细胞,并用含20%(体积分数)胎牛血清的DMEM培养液培养,胰酶消化传代,扩增大鼠骨髓基质细胞。取第3～5代BMSC,用脂质体转染法将外源基因绿色荧光蛋白基因介导进入到骨髓基质细胞内,然后在荧光显微镜下观察,计数表达荧光蛋白细胞的数量,并用台盼兰排斥试验检测转染细胞的活力。 [结果] 1 大鼠BMSC的分离培养 用Percoll淋巴细胞分离液对大鼠骨髓作密度梯度离心,所得细胞为比较一致的球形单个核细胞,台盼兰染色细胞活力达99%。接种24小时后,倒置显微
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