microRNA-101和EZH2基因在前列腺癌干细胞中的表达研究

论文摘要

目的：探寻前列腺癌激素依赖（LNCaP）与激素非依赖（PC-3）细胞株中microRNA-101及EZH2表达差异。流式细胞术分选CSCs,并比较前列腺癌激素依赖CSCs与激素非依赖癌CSCs中microRNA-101及EZH2表达差异,探讨前列腺癌干细胞特异性分子靶点。方法：采用无血清悬浮培养体系（serum-free medium, SFM）培养前列腺癌LNCaP及PC-3细胞富集前列腺癌干细胞,流式细胞术分选SFM细胞CD133+CD44+双阳性细胞（CSCs）; RT-PCR及荧光定量PCR检测CSCs中miR-101及EZH2基因的表达,比较其在PC-3与LNCaP、PC3 CSCs与LNCaP CSCs中的表达差异。结果：PC-3细胞经悬浮培养扩增后,CSCs比例显著提高（p<0.05）, LNCaP细胞经悬浮培养扩增后CSCs含量无明显改变。前列腺癌PC-3细胞株中miR-101表达量是LNCaP的26.8%,而EZH2的表达显著上调达6.681倍。PC-3 CSCs中EZH2的表达显著高于LNCaP CSCs表达,且二者均明显高于贴壁细胞中的表达（p<0.05）。结论：前列腺癌激素非依赖细胞株较激素敏感细胞株miR-101及EZH2表达显著改变；在前列腺癌CSCs中,EZH2基因的表达显著上调,具有一定的癌干细胞基因水平特异性,尤以激素非依赖前列腺癌CSCs较为显著。其可能主导前列腺癌激素非依赖、耐药以及侵袭转移等生物学特性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语词表
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 主要试剂与仪器
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法与步骤
• 2.2.1 试剂的配制
• 2.2.2 细胞培养
• 2.2.3 细胞裂解及总RNA提取
• 2.2.4 普通基因的逆转录反应
• 2.2.5 microRNA-101的逆转录反应
• 2.2.6 普通基因及GAPDH的RT-PCR反应
• 2.2.7 miR-101及U6的RT-PCR检测
• 2.2.8 microRNA-101及EZH2基因的荧光定量检测
• 2.2.9 PC-3与LNCaP细胞的悬浮培养
• 2.2.10 肿瘤细胞表面抗原分析及各细胞组成检测
• 2.2.11 PC-3及LNCaP SFM培养细胞的流式细胞术分选
• 2.2.12 分选后双阳性细胞miR-101、EZH2表达检测检测
• 2.3 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 前列腺癌PC-3及LNCaP细胞的培养
• 3.2 RT-PCR及荧光定量PCR检测
• 3.2.1 RT-PCR及qRt-PCR逆转录聚合酶链反应
• 3.2.2 miR-101在前列腺癌细胞株中的差异表达
• 3.2.3 EZH2在前列腺癌细胞株中的表达差异
• 3.3 PC-3、LNCaP细胞株可形成持续传代的微球囊
• 3.4 PC-3微悬浮培养可富集肿瘤干细胞
• 3.5 激素非依赖与激素依赖CSCs中EZH2的表达显著改变
• 3.6 CSCs中EZH2的表达显著改变
• 第4章 讨论
• 4.1 前列腺癌诊治现状
• 4.2 癌干细胞理论及Pca CSCs在Pca的发生与发展中的意义
• 4.3 悬浮培养富集前列腺癌干细胞
• 4.4 EZH2基因在前列腺癌中特殊地位
• 4.5 miR-101调控EZH2基因的可能机制分析
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 后续研究方向
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
• 参考文献