七氟烷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用及机制探讨

论文摘要

目的：观察七氟烷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤是否具有保护作用,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinases, p38 MAPK）信号传导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤中的意义。方法：取出生1-3天的Sprague-Dawley （SD）大鼠心脏,利用酶消化法分离心肌细胞。通过倒置相差显微镜观察培养细胞的生长状态,并采用a-actin免疫细胞化学法鉴定培养细胞类型及心肌细胞特征。制作心肌细胞缺氧／复氧模型和七氟烷后处理模型,并将培养乳鼠心肌细胞随机分为7组：（1）正常对照组（Control组）细胞于C02培养箱中持续培养3h。（2）缺氧／复氧组（A／R组）细胞缺氧2h,复氧1h。（3）七氟烷后处理组（S-post组）细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min。（4）七氟烷后处理+SB203580组（S-post+SB组）细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予p38 MAPK抑制剂SB203580（终浓度为5μmol/L;溶解于终浓度为0.1%的DMSO）,持续20min。（5）七氟烷后处理+二甲亚砜组（S-post+DMSO组）细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予SB203580溶剂DMSO（终浓度为0.1%）,持续20min。（6）SB203580组（SB组）细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予SB203580（终浓度为5μmol／L；溶解于终浓度为0.1%的DMSO）,持续20min。（7）二甲亚砜组（DMSO组）细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予DMSO（终浓度为0.1%）,持续20min。实验结束时各组分别用比色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）活性、肌酸激酶（creatine kinase, CK）活性,台盼蓝排斥实验检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并提取细胞蛋白,应用Western blot检测]p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK （p-p38 MAPK）蛋白水平。结果：成功培养出大鼠心肌细胞并经免疫组化鉴定证实,细胞数量达到实验要求。与Control组相比,A／R组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高（P<0.05）。与A／R组相比,S-post组LDH和CK活性降低、细胞存活率提高、流式细胞术检测细胞凋亡率降低（P<0.05）。与S-post组相比,S-post+SB组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高（P<0.05）。S-post组与S-post+DMSO组相比,A／R组与SB组以及DMSO组相比,LDH和CK水平、细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,差别无统计学意义（P>0.05）。各组间p38 MAPK水平差别无统计学意义（P>0.05）,与A／R组相比,S-post组p-p38 MAPK蛋白水平升高（P<0.05）, p38 MAPK抑制剂降低了p-p38 MAPK蛋白表达水平（S-post+SB组与S-post组相比,P<0.05）。SB组p-p38水平低于A／R组（P<0.05）, p-p38蛋白水平在S-post组与S-post+DMSO组、A／R组与DMSO组间差别无统计学意义（P>0.05）。结论：体外条件下成功分离、培养出乳鼠心肌细胞。缺氧／复氧可对乳鼠心肌细胞造成损伤。七氟烷后处理可以减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤。七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护机制与激活p38 MAPK信号通路有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 1.1 心肌细胞培养与鉴定
• 1.2 实验分组与模型制备
• 1.3 实验观察指标检测
• 1.4 统计学处理
• 结果
• 2.1 心肌细胞培养与鉴定结果
• 2.2 实验观察指标检测结果
• 讨论
• 3.1 心肌细胞培养与鉴定
• 3.2 缺氧/复氧模型制备
• 3.3 七氟烷后处理的心肌保护作用
• 3.4 p38 MAPK信号传导通路所发挥的作用
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 挥发性麻醉药对缺血/再灌注心肌保护作用机制的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢