纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、粘附和移行的影响

论文摘要

前言纤维连接蛋白（fibronectin,FN）是一类大分子糖蛋白，是细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的重要组成部分。FN的一系列功能区域，可以与纤维蛋白、胶原蛋白、肝素、肌动蛋白、DNA和细胞结合，在细胞与细胞、细胞与基膜间起到桥联作用，维持细胞的正常形态和功能。正常成人晶状体囊膜主要由Ⅳ型胶原和层粘连蛋白构成，在胚胎期还有FN。FN在晶状体的胚胎发育中起重要作用，这提示FN可能是调节晶状体上皮细胞增殖、粘附和移行的重要成分。后发性白内障是白内障手术后最常见的影响视力的并发症。白内障囊外摘除术后残留的晶状体上皮细胞（1ens epithelial cells,LECs）在后囊膜上的增殖、粘附和移行，继而纤维化并合成细胞外基质（ECM）是后囊浑浊（posterior capsular opacification,PCO）发生的重要机制。与完整晶状体相比，术后血房水屏障破坏，残留晶状体上皮细胞周围的细胞外基质（ECM）发生改变，FN的引入及在后囊膜的沉积可能在后发障的发生发展过程中起重要作用。研究表明，FN能显著促进体外培养猪晶状体上皮细胞的增殖及兔晶状体上皮细胞的粘附和移行，在对人晶状体上皮细胞系SRA 01／04（用SV40大T抗原转染）的研究中，FN促进其粘附和移行的作用显著，但促其增殖作用并不明显。细胞表面存在着介导细胞增殖、粘附和移行的整合素受体，它是细胞粘附分子（CAM）的重要组成部分，由α亚单位和β亚单位结合构成具有跨膜糖蛋白特性的异二聚体，α亚基与配体的识别有关，β亚基则将信号传导至细胞骨架，介导细胞与细胞或细胞与基质间的相互作用，参与细胞的定位和附着以及细胞内外消息的传递。基因的诱导表达、蛋白激酶磷酸化、细胞内pH及Ca2+变化、肌醇脂代谢改变等均与此有关。Nishi首次在白内障患者晶状体上皮细胞中检测到β1整合素的表达，从而揭示了某些眼病与整合素之间的联系。整合素α5β1是FN的主要受体，可与FN结构中的RGD（Arg-Gly-Asp）序列结合，调节晶状体上皮细胞的粘附及增殖。整合素的表达，可能在术后晶体上皮细胞与后囊的粘附中发挥作用。人晶状体上皮细胞系HLE-B3是通过含有SV40的永生化基因的腺病毒12感染细胞而获得的永生化细胞系，既具有HLE细胞的特性又具有高增殖潜力，与原代培养的细胞相比，其主要优势在于可以获得大量细胞进行细胞内各种分子事件的大范围研究。本研究通过观察FN对HLE-B3的增殖、粘附和移行的影响及其受体的表达，试图进一步了解HLE-B3的生物学特性及FN在后囊浑浊（PCO）中的作用，为探索后发障的发病机制提供依据。目的探讨纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系HLE-B3的增殖、粘附和移行的影响及其受体整合素α5亚基的表达。方法培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3，接种于不同浓度的FN（0μg／ml、10μg／ml、20μg／ml、40μg／ml）包被的培养板中，倒置显微镜下观察HLE-B3的生物学特性，采用WST-8法检测细胞的增殖、粘附情况，划痕法观察细胞的移行并记录细胞缺损区闭合时间，免疫细胞化学法观察整合素α5亚基的表达。结果各浓度FN包被后，增殖实验中WST-8法检测的吸光值增高不明显（P＞0.05）。随FN包被浓度的增高，粘附实验中的吸光值逐渐增高，划痕实验中缺损区闭合的时间逐渐缩短，各浓度组在统计学上具有显著性差异。整合素α5亚基随FN包被浓度的增高表达增强（P＜0.05）。结论FN具有显著促进HLE-B3粘附和移行的作用，同时能上调其受体整合素α5亚基的表达，但促进HLE-B3增殖的作用并不明显。本研究进一步揭示了HLE-B3的生物学特性，提示FN在后发性白内障的发生发展过程中可能起重要作用。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、粘附和移行的影响
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 在学期间科研成绩
• 致谢
• 个人简介