CpG ODN的设计、筛选及其对乳腺癌和柯萨奇病毒的作用研究

论文摘要

CpG ODN是含有非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸基序的单链脱氧寡核苷酸,通过与TLR9的结合,能直接活化机体的天然免疫系统,诱导产生以Th1型为主的免疫应答,间接活化获得性免疫。因此,CpG ODN被广泛的应用于肿瘤、病毒感染及过敏性疾病的治疗中,并在临床前及临床实验研究中取得了可喜的成果。根据CpG ODN的结构特点,在分析其二级结构的基础上,利用生物信息学方法,设计了一系列含有多个茎环结构的新型CpG ODN,经过筛选,得到了数条分属不同类型的新型CpG ODN。在此基础上,我们对其中的YWODN01和YWODN02进行了深入的研究。结果表明,在小鼠乳腺癌模型中,经引流淋巴结区注射的YWODN 02表现出强效的抑瘤效果,并使相当数量的小鼠发生了肿瘤消退。进一步的研究表明,引流淋巴结及肿瘤内免疫细胞的增多和特异性免疫记忆的调动与YWODN 02的抗肿瘤作用有关。因此,YWODN 02的单独应用可能成为一种对乳腺癌有治疗作用的新型制剂。此外,YWODN 02在体外能刺激的人PBMC产生抗病毒物质,其培养上清能保护Hela细胞抵抗CVB病毒的感染。在柯萨奇病毒感染小鼠模型中,注射YWODN 02加速了小鼠的病程,加重感染小鼠的心肌的病理改变。这提示,在使用CpG ODN治疗病毒感染性疾病时,应慎重选择应用的时机。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 第1章 绪论
• 研究背景
• 文献综述
• 1.1 CpG ODN 的研究进展
• 1.1.1 CpG ODN 概述
• 1.1.2 CpG ODN 的类型及结构特点
• 1.1.3 CpG ODN 诱发的信号传导
• 1.1.4 CpG ODN 在治疗感染性疾病上的应用
• 1.1.5 CpG ODN 在治疗肿瘤上的应用
• 1.2 乳腺癌的研究现状和治疗进展
• 1.2.1 手术治疗
• 1.2.2 放射治疗
• 1.2.3 化疗药物治疗
• 1.2.4 内分泌治疗
• 1.2.5 分子靶向治疗的研究
• 1.2.6 肿瘤引流淋巴结的免疫学性质及其抗肿瘤作用
• 1.3 柯萨奇病毒感染性疾病
• 1.3.1 柯萨奇病毒的基本特征
• 1.3.2 柯萨奇病毒的致病机制
• 1.3.3 柯萨奇病毒的预防和治疗
• 1.4 材料与方法
• 1.4.1 主要材料和仪器
• 1.4.2 CpG ODN 的鉴定及体外刺激功能的筛选
• 1.4.3 CpG ODN 抗肿瘤能力的检测
• 1.4.4 CpG ODN 抗CVB3 的能力检测
• 1.4.5 结果的统计学处理
• 第2章 论文主体
• 2.1 实验结果
• 2.1.1 含有二级结构的CpG ODN 的设计和筛选
• 2.1.1.1 CpG ODN 的设计和二级结构的预测
• 2.1.1.2 CpG ODN 的合成和鉴定
• 2.1.1.3 CpG ODN 的筛选实验
• 2.1.2 YWODN 01、YWODN 02 的体外活性研究
• 2.1.2.1 YWODN 01、YWODN 02 对人PBMC 的刺激性的比较
• 2.1.2.2 YWODN 01、YWODN 02 对人PBMC 中各淋巴细胞亚群的激活作用
• 2.1.2.3 YWODN 01、YWODN 02 刺激人PBMC 表面协同刺激分子的表达
• 2.1.2.4 YWODN 01、YWODN 02 对小鼠脾细胞刺激能力的特点
• 2.1.2.5 YWODN 01 的碱基改造及其功能的变化比较
• 2.1.2.6 YWODN 01、YWODN 02 的种属特异性的比较
• 2.1.3 YWODN 01、YWODN 02 的抗肿瘤作用研究
• 2.1.3.1 ODN 对肿瘤细胞的体外作用
• 2.1.3.2 不同注射方式应用ODN 对小鼠乳腺癌模型的作用
• 2.1.3.3 YWODN 01、YWODN 02 抗EMT6 肿瘤效果的观察
• 2.1.3.4 预防性注射YWODN 02 的抗肿瘤作用
• 2.1.3.5 引流区淋巴结注射YWODN 02 对小鼠脾及淋巴结的影响
• 2.1.3.6 引流区淋巴结注射YWODN 02 对肿瘤浸润淋巴细胞的影响
• 2.1.3.7 引流区淋巴结注射YWODN 02 促进了非特异和特异性的免疫应答
• 2.1.3.8 引流区淋巴结注射YWODN 02 对淋巴结内调节性T 细胞的影响
• 2.1.4 YWODN 02 的对柯萨奇病毒的作用研究
• 2.1.4.1 YWODN 02 刺激人PBMC 培养上清的抗CVB3 作用
• 2.1.4.2 YWODN 02 诱导人PBMC 产生抗CVB3 作用的量效关系
• 2.1.4.3 YWODN 02 对柯萨奇病毒感染小鼠的体重的影响
• 2.1.4.4 YWODN 02 加重了柯萨奇病毒感染小鼠的心肌病变
• 2.2 讨论
• 2.2.1 YWODN 01 和YWODN 02 的结构和作用特点
• 2.2.2 YWODN 01 和YWODN 02 对小鼠乳腺癌的抑制作用
• 2.2.3 YWODN 02 对柯萨奇病毒的作用
• 第3章 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT