西北地区土壤放线菌的选择性分离及农用活性筛选

论文摘要

放线菌是微生物药物的主要生产者。到目前为止,在医学、农业上使用的大多数抗生素都是由放线菌产生的。放线菌以其活性物质的多样性而引起众多学者的兴趣,放线菌在土壤中分布广泛,从土壤中分离具农用活性的放线菌是生物农药创制和开发的重要方向。本研究以从新疆、青海和陕西等地采集的11份土样为材料,从中选择性分离到136株放线菌,并对分离出的放线菌进行农用活性筛选。得出以下主要结果:1.采用选择性分离培养基从11份土样中分离得到136株放线菌。在供试的5种培养基中,海藻糖-脯氨酸琼脂培养基和HVA培养基分离效果较好,有利于放线菌的分离,其中以海藻糖-脯氨酸琼脂培养基分离效果最好,共分离出55株放线菌,占总株数的40.4%,土壤浸渍液培养基分离效果最差。2.从136株放线菌中筛选出1株抗TMV活性较好的菌株（编号:ZX01）和2株抑菌活性较好的菌株（编号:H-11-1和H-16-2）。杀虫活性结果表明,136株放线菌发酵液对供试粘虫3龄幼虫均无明显的毒杀活性;除草活性结果表明,136株放线菌发酵液对指示作物小麦种子发芽和根的生长均无明显的抑制活性;采用半叶枯斑法,结合初侵染和复制增殖试验测定了136株放线菌发酵液对TMV的抑制作用,发现菌株ZX01对TMV有较好的抑制活性;以番茄灰霉病为材料进行活体组织筛选,发现菌株H-11-1和H-16-2发酵液对番茄灰霉病有较好的抑制作用。3.菌株ZX01发酵液对TMV有较好的抑制活性。（1）半叶枯斑法测定结果表明,菌株ZX01发酵液对TMV病毒粒子有较好的体外钝化活性,发酵液不同时间的体外钝化效果都超过了60%,均显著优于病毒A（0.5 mg/mL）处理,且随着钝化时间的增加,抑制率也随之增加,钝化60 min的抑制率为92.65%;发酵液不同倍数稀释液对TMV病毒粒子体外钝化结果表明,其抑制效果与浓度呈正相关性,50倍稀释液的抑制率仅为10.54%。（2）菌株ZX01发酵液对TMV初侵染具有明显的抑制作用。菌株ZX01发酵液对TMV侵染心叶烟草有较好的预防作用,施药12、24和48 h后接种TMV,抑制率分别为85.64%、70.31%和58.27%,均显著优于病毒A（0.5 mg/mL）处理;发酵液不同倍数稀释液对TMV侵染心叶烟12 h后的预防效果表明,其抑制效果也与浓度呈正相关性,50倍稀释液的抑制率仅为8.42%。（3）菌株ZX01发酵液对TMV病毒粒子在不同寄主体内的增殖有一定的抑制作用。在心叶烟上接种TMV 6、12和24 h后涂抹发酵液,其抑制率分别为64.30%、20.73%和15.02%,均显著优于病毒A（0.5 mg/mL）处理;叶圆片试验结果表明,菌株发酵液对TMV在普通烟K326增殖的抑制率为53.27%。4.菌株H-11-1对供试3种病原真菌有较强的抑制作用。采用对峙法和生长速率法测定,结果表明菌株H-11-1对番茄灰霉病菌有较强的抑制作用,其抑菌带大于12 mm,抑制率为98.92%;组织法结果表明,菌株H-11-1发酵液对番茄灰霉病和油菜菌核病有较好的抑制作用,其保护效果分别为93.02%和92.27%,治疗效果分别为60.86%和82.68%;盆栽试验发现,菌株H-11-1发酵液对黄瓜枯萎病也具有一定的防治效果,保护效果和治疗效果分别为67.39%和46.20%。5.通过培养特征观察和生理生化特性测定,将菌株H-11-1初步归为链霉菌属淡紫灰类群链霉菌（Streptomyces lavendularectus）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 土壤放线菌的研究概况
• 1.2 土壤放线菌的选择性分离
• 1.2.1 选择性分离培养基
• 1.2.2 选择性分离的方法
• 1.2.3 物理或化学预处理方法
• 1.2.4 富集培养
• 1.3 农用抗生素的研究概况
• 1.3.1 杀虫抗生素
• 1.3.2 杀菌抗生素
• 1.3.3 除草抗生素
• 1.3.4 抗病毒抗生素
• 1.4 论文设计思路
• 第二章 土壤放线菌的选择性分离
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 试验方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 不同土样放线菌的分离
• 2.2.2 培养基对放线菌分离的影响
• 2.3 小结与讨论
• 第三章 土壤放线菌发酵液农用活性初步筛选
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 菌株发酵液的杀虫活性测定结果
• 3.2.2 菌株发酵液的除草活性测定结果
• 3.2.3 菌株发酵液抗TMV 活性初步筛选
• 3.2.4 菌株发酵液抑菌活性筛选
• 3.3 小结与讨论
• 第四章 菌株ZX01 发酵产物抗TMV 活性研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 菌株ZX01 发酵产物体外钝化TMV 活性
• 4.2.2 菌株ZX01 发酵液对TMV 初侵染作用的抑制效果
• 4.2.3 菌株ZX01 发酵液对TMV 增殖作用的抑制效果
• 4.3 小结与讨论
• 第五章 2 株放线菌发酵液抑菌活性研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 试验材料
• 5.1.2 试验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 发酵液离体活性测定结果
• 5.2.2 发酵液活体试验测定结果
• 5.2.3 菌株H-11-1 发酵液抑制黄瓜枯萎病盆栽试验结果
• 5.3 小结与讨论
• 第六章 菌株H-11-1 的形态鉴定
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 试验材料
• 6.1.2 试验方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 菌株H-11-1 的培养特征观察
• 6.2.2 菌株H-11-1 生理生化特性测定的结果
• 6.3 小结与讨论
• 第七章 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介