类固醇激素受体辅激活子3（SRC-3）在小鼠腹膜炎中的作用及抗炎药物的筛选

论文摘要

SRC-3作为类固醇激素受体辅激活子家族的成员,对机体的多种生物学功能具有重要作用,其中可以通过抑制脂多糖刺激的机体炎症反应来发挥免疫调控作用,但是目前还不清楚SRC-3是否在机体脓毒症的发生中也具有调控作用。我们建立了小鼠腹膜炎模型,通过对SRC-3基因敲除小鼠的研究表明,SRC-3的缺失会导致机体在感染大肠杆菌后产生强烈的炎症反应并导致机体对细菌清除能力的降低,进一步对小鼠腹腔巨噬细胞的研究发现SRC-3与巨噬细胞的表面受体SR-A、抗氧化酶Catalase及抗凋亡蛋白Bcl-2、cIAP-2及cFLIPL的表达具有相关性,从而影响巨噬细胞对细菌的吞噬活性及细胞的凋亡程度,这些都表明SRC-3不仅对细菌感染后机体的炎症反应有重要的调控作用,也能有效的增强机体对细菌的清除能力,从而在机体发生腹膜炎的过程中起到保护作用。另外,我们构建了一个方便高效筛选抗炎药物的报告系统,并以其为平台成功地筛选到了一种化合物一环氧二烯（Mycoepoxydiene,MycoE）,它在体内体外都能有效抑制脂多糖刺激的炎症反应,但相关机制有待进一步的研究。我们的工作为以后进一步揭示脓毒症的发病机制提供了一定的理论依据,也为开发有效治疗脓毒症的药物提供了新的思路。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 核受体
• 1.1 核受体分类
• 1.2 核受体结构
• 1.3 核受体辅调节子
• 1.3.1 辅激活子
• 1.3.2 辅抑制子
• 1.4 核受体作用机制
• 1.5 核受体与免疫
• 1.5.1 GR
• 1.5.2 PPAR
• 1.5.3 LXR
• 1.5.4 VDR
• 1.5.5 其它
• 2 SRC家族
• 2.1 类固醇激素及其受体
• 2.2 SRC家族
• 2.2.1 SRC家族分类
• 2.2.2 SRC基因定位及结构
• 2.2.3 SRC基因的表达及翻译后修饰
• 2.2.4 SRC家族的生物学功能
• 3 脓毒症
• 3.1 病原体
• 3.2 宿主
• 3.2.1 病原体识别系统与炎症反应
• 3.2.2 免疫抑制与免疫细胞凋亡
• 3.3 小结
• 4 立题背景
• 4.1 SRC-3在大肠杆菌引起小鼠腹膜炎中的作用
• 4.2 抗炎药物筛选系统的构建与应用
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌株、细胞与小鼠
• 2.1.1.1 菌株
• 2.1.1.2 细胞
• 2.1.1.3 小鼠
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 DNA相关实验及方法
• 2.2.1.1 大肠杆菌感受态细胞的制备和DNA转化
• 2.2.1.2 质粒DNA的提取
• 2.2.1.3 TNF-α荧光素酶报告质粒的构建
• 2.2.2 RNA相关实验及方法
• 2.2.2.1 RNA的提取
• 2.2.2.2 反转录合成cDNA
• 2.2.2.3 半定量RT-PCR
• 2.2.2.4 实时荧光定量PCR
• 2.2.3 蛋白质相关实验及方法
• 2.2.3.1 蛋白质样品制备
• 2.2.3.2 蛋白质浓度测定（BCA法）
• 2.2.3.3 蛋白质的SDS-PAGE电泳及Western blotting分析
• 2.2.4 细胞相关实验及方法
• 2.2.4.1 细胞培养及传代
• 2.2.4.2 细胞瞬时转染及稳定转染
• 2.2.4.3 细胞siRNA转染
• 2.2.4.4 细胞毒性实验（MTT法）
• 2.2.4.5 细胞荧光素酶活性检测
• 2.2.4.6 小鼠腹腔巨噬细胞的提取
• 2.2.4.7 用流式细胞仪分析细胞周期、ROS及吞噬活性
• 2.2.4.8 小鼠腹腔巨噬细胞杀菌活性的测定
• 2.2.5 小鼠相关实验及方法
• 2.2.5.1 SRC-3基因敲除小鼠的鉴定
• 2.2.5.2 小鼠感染大肠杆菌实验
• 2.2.6 其他实验及方法
• 2.2.6.1 组织切片及苏木精-伊红染色
• 2.2.6.2 ALT、AST及BUN测定
• 2.2.6.3 TNF-α、IL-1β、IL-6等细胞因子的测定（ELISA法）
• 2.2.6.4 NO测定（硝酸还原酶法）
• 第三章 结果和讨论
• 3.1 SRC-3在大肠杆菌引起小鼠腹膜炎中的作用
• 3.1.1 大肠杆菌诱导小鼠腹膜炎模型的建立
• 3.1.2 SRC-3的缺失导致小鼠对腹膜炎的抵抗力降低
• -/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后炎症反应情况'>3.1.3 SRC-3^-/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后炎症反应情况
• -/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后组织损伤程度'>3.1.4 SRC-3^-/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后组织损伤程度
• -/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后细菌在体内的增殖与扩散情况'>3.1.5 SRC-3^-/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后细菌在体内的增殖与扩散情况
• 3^-/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后白细胞在腹腔的募集情况'>3.1.6 SRC₃^-/-及野生型小鼠感染大肠杆菌后白细胞在腹腔的募集情况
• -/-及野生型小鼠中血清的抑菌活性'>3.1.7 SRC-3^-/-及野生型小鼠中血清的抑菌活性
• -/-及野生型小鼠中抗菌蛋白的表达情况'>3.1.8 SRC-3^-/-及野生型小鼠中抗菌蛋白的表达情况
• -/-及野生型小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬及杀菌活性'>3.1.9 SRC-3^-/-及野生型小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬及杀菌活性
• -/-及野生型小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡情况'>3.1.10 SRC-3^-/-及野生型小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡情况
• 3.1.11 讨论
• 3.2 基于TNF-α的抗炎药物筛选系统的构建与应用
• 3.2.1 基于TNF-α的抗炎药物筛选系统的构建
• 3.2.2 基于TNF-α的抗炎药物筛选系统的应用
• 3.2.3 讨论
• 参考文献
• 图表索引
• 缩略语及中英文对照
• 致谢
• 在学期间发表和待发表论文