三七凝胶对家兔椎板切除术后硬膜外瘢痕中胶原代谢和瘢痕挛缩的影响

论文摘要

研究背景脊柱椎板减压术后硬膜外瘢痕是导致继发性椎管狭窄的重要原因之一,因此,预防硬膜外瘢痕粘连,防止继发性椎管狭窄,对手术预后症状的改善,功能的恢复具有重要意义。中药通过活血化瘀、益气止血减少瘢痕形成的研究多有报道,我们前期动物实验研究证实三七凝胶能够有效预防椎板减压术后硬膜外瘢痕粘连的形成。中药三七具有止血活血及抗纤维化作用,透明质酸钠为生物体内普遍存在的酸性粘多糖,具有良好的生物相容性,并具有一定的预防术后瘢痕粘连的作用。本研究采用中药三七配合载体透明质酸钠作为凝胶基质,制成三七透明质酸钠凝胶（以下简称三七凝胶）,作为新的手术中植入材料,在胶原代谢和瘢痕挛缩等方面进行预防瘢痕粘连的机理探索。研究目的1观察三七凝胶对家兔硬膜外瘢痕组织的病理形态学改变及工型、Ⅲ型胶原纤维的生长情况的影响。2研究三七凝胶对家兔硬膜外瘢痕组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1、MMP-1、α-SMA等相关细胞因子和胶原酶表达的影响,探讨三七凝胶在胶原代谢和瘢痕挛缩方面对硬膜外瘢痕的作用。研究方法1三七凝胶的配制取三七生药加60%乙醇回流提取,醇提液回收乙醇,浓缩,加水返溶,取上清液,加入透明质酸钠,静置使完全溶胀,搅拌均匀,加注射用水调整体积,灭菌30分钟,即得（每毫升凝胶含三七生药0.5g）。2实验方法大耳白品系家兔96只,体重2.0～2.5kg,6月龄,雌雄各半,按照完全随机方法分为生理盐水组、三七组、透明质酸钠组、三七凝胶组,制作家兔椎板切除模型,分别在硬膜囊周围滴注生理盐水、三七浓缩液、透明质酸钠、三七凝胶各0.5ml,各组术后1、2、4、8周取材,HE染色观察硬膜外瘢痕组织中的病理形态改变,苦味酸-天狼星红染色观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原生长分布情况,原位杂交方法分析Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TIMP-1mRNA、MMP-1mRNA的表达,免疫组织化学方法分析α-SMA抗体的表达。结果1病理形态观察1.1 HE染色①一周：硬膜外见未完全吸收的血肿被炎性细胞包绕,胞外有少量的新生胶原纤维。生理盐水组、三七组、透明质酸钠组可见肉芽组织与硬膜囊结合较紧密,三七凝胶组硬膜外可见有潜在的腔隙,硬膜外血肿及炎性细胞较其它三组明显减少（图1-1～1-4）。②二周：硬膜外血肿已吸收完全,被肉芽组织填充,胞外新生胶原纤维增多,三七凝胶组硬膜外粘连不明显,生理盐水组广泛粘连,较三七组、透明质酸钠组更加明显（图1-5～1-8）。③四周：肉芽组织纤维化明显,胶原纤维趋于成熟,三七凝胶组瘢痕与硬膜囊无明显粘连,其间有空隙存在,生理盐水组粘连进一步加重,三七组、透明质酸钠组较生理盐水组粘连有所减轻（图1-9～1-12）。④八周：瘢痕组织出现挛缩,部分组织骨化闭合椎板缺损处,三七凝胶组硬膜外间隙明显,生理盐水组粘连致密,三七组、透明质酸钠组粘连程度介于前两者之间（图1-13～1-16）。1.2苦味酸-天狼星红染色苦味酸-天狼星红染色切片在普通显微镜下胶原纤维呈粉红色,在偏振光显微镜下,Ⅰ型胶原呈粗大的红色或黄色纤维,Ⅲ型胶原呈细的网状或点状绿色纤维,多分布于Ⅰ型胶原周围。①一周：造模区的胶原纤维较少,可见疏松的条束状Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原呈点状细纤维,散布于Ⅰ型胶原周围。各组胶原纤维较稀少,排列无明显规律性（图2-1～2-4）。②二周：造模区的胶原纤维较一周时明显增多,可见较为致密的条束状Ⅰ型胶原,点状Ⅲ型胶原散布于Ⅰ型胶原周围。生理盐水组、三七组、透明质酸钠组中Ⅰ型胶原明显增多,纵横交错,排列较为紊乱,Ⅲ型胶原相对较少。三七凝胶组中Ⅰ型胶原顺序排列,Ⅲ型胶原排布较其它三组密集（图2-5～2-8）。③四周：造模区胶原纤维较二周时明显增多增粗,分布更加密集,Ⅰ型胶原明显增粗,Ⅲ型胶原呈网状散布于Ⅰ型胶原周围。生理盐水组、三七组、透明质酸钠组中Ⅰ型胶原纵横交错,排列紊乱,三七凝胶组中Ⅰ型胶原顺序排列,趋于规则,较其它三组稀疏,Ⅲ型胶原排布较其它三组密集（图2-9-2-12）。④八周：造模区胶原纤维较四周时有所减少,Ⅰ型胶原呈束带状分布,Ⅲ型胶原呈网状分布于Ⅰ型胶原四周。生理盐水组、三七组、透明质酸钠组中Ⅰ型胶原纵横交错,排列紊乱,三七凝胶组中Ⅰ型胶原顺序排列,规则,较其它三组稀疏,Ⅲ型胶原排布较其它三组密集（图2-13～2-16）。2胶原纤维面密度Ⅰ型胶原面密度三七凝胶组在用药4周、8周时明显低于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01）。三七组、透明质酸钠组在用药1周、2周、4周时明显低于生理盐水组（P<0.01或P<0.05）；Ⅲ型胶原面密度三七凝胶组在用药4周、8周时明显高于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01）。三七组、透明质酸钠组在用药1周、2周、4周时明显高于生理盐水组（P<0.01或P<0.05）。（表1；表2）3相关细胞因子、胶原酶的表达3.1Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达Ⅰ型胶原mRNA表达三七凝胶组在用药4周时明显低于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01）,三七组、透明质酸钠组在用药1周、2周时明显低于生理盐水组（P<0.01或P<0.05）；Ⅲ型胶原mRNA表达三七凝胶组在用药4周时明显高于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01）。（表3；表4）3.2 TIMP-1 mRNA、MMP-1 mRNA的表达TIMP-1 mRNA表达用药2、4周时三七凝胶组明显低于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01或P<0.05）,三七组、透明质酸钠组明显低于生理盐水组（P<0.01或P<0.05）；MMP-1 mRNA表达三七凝胶组在用药2、4周时明显高于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01或P<0.05）,三七组、透明质酸钠组在用药2周时明显高于生理盐水组（P<0.05）。（表5；表6）3.3α-SMA抗体的表达α-SMA抗体表达在用药1周、2周时,三七凝胶组、三七组、透明质酸钠组明显低于生理盐水组（P<0.01或P<0.05）,三七凝胶组与三七组、透明质酸钠组差异不显著（P>0.05）；用药4周、8周时,三七凝胶组明显低于生理盐水组、三七组、透明质酸钠组（P<0.01或P<0.05）,三七组、透明质酸钠组与生理盐水组差异不显著（P>0.05）。（表7）结论1三七凝胶能够减轻硬膜外瘢痕粘连,改善胶原纤维排列。2三七凝胶促进Ⅲ型胶原合成,抑制Ⅰ型胶原合成,降低瘢痕硬度,增加其弹性。3三七凝胶抑制TIMP-1的活性,增强MMP-1的表达,减轻瘢痕纤维化。4三七凝胶抑制α-SMA的表达,减轻瘢痕挛缩。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要（Abstract）
• 英文缩略语
• 第一部分 文献研究
• 综述创伤后组织瘢痕愈合过程中胶原方面的研究进展
• 参考文献
• 前言
• 第二部分 实验研究
• 实验一:三七凝胶预防家兔硬膜外瘢痕粘连的病理形态观察
• 实验二:三七凝胶对家兔硬膜外瘢痕粘连相关细胞因子的影响的研究
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附图
• 个人简历