导读:本文包含了低氧反应元件论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:低氧诱导因子,低氧反应元件,荧光素酶,报告基因
低氧反应元件论文文献综述
屈野,陈晓,杨静,郭小芹,李玲[1]（2015）在《低氧反应元件荧光素酶报告载体的构建及鉴定》一文中研究指出【目的】构建低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)荧光素酶报告载体,以检测和分析细胞内低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1)表达。【方法】化学合成HRE的核心启动子序列(6×HRE),将其定向克隆入p GL3-BASIC,经PCR、酶切和测序鉴定,获得p GL3-HRE荧光素酶报告载体;然后以p GL3-HRE和β-gal DNA共转染MG63细胞,通过物理和化学低氧来检测其活性,并western blotting分析转染细胞HIF-1表达水平。【结果】获得了p GL3-HRE荧光素酶报告载体,PCR、酶切和测序鉴定均与预期一致;物理低氧(1%O2)和化学低氧(不同浓度Co Cl2)均可诱导转染MG63细胞荧光素酶表达水平的升高(P<0.05),其中以Co Cl(3002μmol/L)组最为显着,western blotting结果也显示Co Cl2(300μmol/L)组HIF-1表达水平更为显着(P<0.05),与荧光素酶表达趋势一致。【结论】成功构建了HRE荧光素酶报告载体,为进一步研究HIF-1的表达调控作用及筛选抗低氧药物提供了工具。(本文来源于《武警后勤学院学报(医学版)》期刊2015年12期）
张军峰,史利利,张力,赵朝华,杨蓬勃[2]（2015）在《低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡》一文中研究指出目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。(本文来源于《解剖学报》期刊2015年05期）
姜桢,曹永梅,曾真,顾玉春,季莹莹[3]（2015）在《低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用》一文中研究指出目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内Bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Bcl-2基因沉默明显下调细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显着增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-Bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显着增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强Bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2015年05期）
聂小维,孙立军,郝跃文,杨广笑,王全颖[4]（2011）在《构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体》一文中研究指出目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF-binding site,HBS)A/GCGTG(4×HBS)的36 bp核酸片段和插入到CMV启动子TATA Box上游的间隔区35 bp的核酸序列,并运用PCR方法扩增。测序正确后,通过常规分子生物学重组方法,将原AAV载体质粒中CMV启动子替换成为含有最小人工合成HRE的CMV启动子,重组构建了低氧反应元件调控的AAV载体。并在该载体CMV启动子下游的多克隆位点插入具有6×His标签的NT4-6His-PR39融合肽序列。磷酸钙沉淀法包装表达NT4-6His-PR39融合肽序列的重组AAV。重组病毒感染人宫颈癌细胞(HeLa),化学性低氧培养,使用免疫组织化学观察低氧条件的诱导表达作用。结果:基因测序结果和酶切结果表明,我们已经把人工合成的HRE,以正确的间隔插入到CMV启动子的上游,成功地构建了HRE调控的AAV重组载体。重组病毒感染的细胞在常氧和低氧诱导表达的结果表明,在启动子上游插入人工合成的微小HRE能够有效调控重组腺相关病毒的表达。结论:使用PCR方法可以将人工合成的HER插入缺乏内切酶识别点的CMV启动子上游,可以制备低氧调控的真核表达载体。人工合成的微小HRE能够有效的调控CMV启动子控制的下游基因表达。该载体的成功制备在缺血性心脑血管病的预防和治疗中具有重要的理论和使用价值。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2011年03期）
董红燕,王强,张中明,袁延亮,张宜乾[5]（2009）在《低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF_(165)基因表达对新生血管的影响》一文中研究指出目的探讨动物整体水平下低氧反应元件(HRE)调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165表达,应用CD31及α-SMA免疫组化染色测定缺血心肌新生血管密度变化。结果心肌缺血早期,伴随内源性HIF-1α表达增加,hVEGF165mRNA及蛋白表达相继升高,缺血4~6周至高峰(P<0.01),缺血12周,hVEGF165表达下调至缺血前水平。缺血12周,转基因组CD31(+)血管密度显着高于缺血对照组(P<0.01);但是,与缺血前相比,缺血12周,转基因组α-SMA(+)血管密度显着低于缺血前水平(P<0.01)。结论HIF-1α-HRE对缺血心肌转染hVEGF165表达发挥了有效的正相调控作用,有效地促进缺血心肌毛细血管生成。但hVEGF165作为促血管生成早期调节因子,其促生血管的结构尚不完整。(本文来源于《徐州医学院学报》期刊2009年11期）
王小忠,彭启全,彭云恒,廖文鹏[6]（2009）在《低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用》一文中研究指出目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体外感染肝癌细胞系HepG2后分别在正常和低氧条件下培养。分别采用反转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting)技术检5测TKmRNA及蛋白表达情况,并用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理后以MTT法检测细胞的增殖情况。结果:RT-PCR及Western blotting结果显示,仅转染重组腺病毒Ad-HRE-TK并在低氧条件下培养的HepG2细胞特异性表达TK基因及蛋白。HepG2细胞感染Ad-HRE-TK后,在低氧培养条件下对GCV的敏感性明显增加,在感染复数(MOI)为100并用50mg/LGCV处理时,则有95%以上HepG2细胞被杀死。而正常氧浓度下培养组,未能观察到GCV的杀伤作用。结论:低氧条件下,HRE可特异性地促进HSV-TK基因的表达,从而诱导GCV的毒性作用。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2009年08期）
苏燕,李宏伟,张静,王春玲,修瑞娟[7]（2008）在《人转化生长因子-β2启动子区低氧反应元件突变体报告基因的构建》一文中研究指出目的:构建人转化生长因子-β2(Transforming growth factor-β2,TGF-β2)启动子区低氧反应元件(hypoxia responsive element,HRE)突变体报告基因。方法:利用重迭延伸PCR技术,以人TGF-β2启动子区报告基因(TGF-β2-pGL3-Basic)为模板,对TGF-β2启动子区(-270bp～+280bp)-114bp、-73bp、-49bp、-4bp和-73/-49 bp位点的低氧反应核心序列5′-RCGTG-3′分别进行定点突变,然后将此突变片段插入荧光素酶报告载体pGL3-Basic进行基因测序。结果:各突变载体的测序结果与预期完全一致。结论:人TGF-β2启动子区HRE突变体报告基因构建成功,为今后进一步研究TGF-β2的低氧调控奠定了基础。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2008年01期）
徐磊,张凯伦,谢艾妮,夏家红[8]（2007）在《低氧反应元件对大鼠骨骼肌成肌细胞转染表达血管内皮生长因子基因的调控作用》一文中研究指出目的:研究低氧反应元件(HRE)对血管内皮生长因子(VEGF)基因121在原代培养大鼠骨骼肌成肌细胞中转染表达的调控作用。方法:利用分子生物学方法,构建pEGFP-C3-9HRE-CMV-VEGF121载体,通过脂质体介导将其转染到原代培养的大鼠骨骼肌成肌细胞中。在不同低氧浓度及不同缺氧时间下培养,通过RT-PCR、Western-Blot及荧光显微镜检测转基因成肌细胞的基因表达情况。结果:低氧浓度组可见明显目的基因条带,且随着氧浓度的降低及缺氧时间的延长,目的基因表达增强;低氧环境下,转染后的成肌细胞表达VEGF121蛋白产物明显增加;低氧环境下可见报告基因EGFP表达,常氧环境下未见报告基因表达。结论:以多拷贝HRE构建低氧启动子插入VEGF基因上游,可作为控制VEGF基因表达的开关,这对于防止VEGF基因转染的成肌细胞移植后VEGF基因过度表达所引起的安全问题,提高基因治疗的安全性有重要意义。(本文来源于《临床心血管病杂志》期刊2007年06期）
姜波,张中明,董红燕[9]（2006）在《低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF_(165)基因表达的调控》一文中研究指出目的探讨低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165(human vascular endous growth factor 165,hVEGF165)基因表达的调控作用。方法在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可复灌的心肌缺血模型。携带9拷贝HRE(9HRE)-hVEGF165的腺相关病毒转染模型心肌,转染后4天,复灌组二次开胸打开钛夹恢复缺血区血供。取各组心肌组织,RT-PCR法测定hVEGF165mRNA的表达情况;免疫组化及免疫印迹法测定hVEGF165蛋白的表达情况;Ⅷ因子免疫组化染色检测局部毛细血管情况。结果缺血心肌转导hVEGF165基因后,hVEGF165蛋白表达量明显增高,而复灌组表达明显减少(P<0.01)。结论9HRE作为调控缺血心肌组织内转导的hVEGF165基因的氧敏感开关灵敏、高效,使hVEGF165基因在缺血时高度表达,而复灌后表达水平下降。(本文来源于《徐州医学院学报》期刊2006年05期）
董红燕,张中明,闫英群[10]（2006）在《缺氧、复氧条件下低氧反应元件(HRE)对心肌细胞转染hVEGF_(165)基因表达的调控作用》一文中研究指出目的:探讨缺氧、复氧条件下,低氧反应元件(HRE)作为氧条件基因表达控制开关,对心肌细胞转染rAAV-HRE9-hVEGF165基因表达的调控作用。方法:分离新生SD大鼠心肌细胞,采用无血清培养,将在HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞。实验共分为8组:Ⅰ组(空白对照组):常氧培养24h(氧浓度21%);Ⅱ组(缺氧对照组):常氧培养16h,缺氧8h(氧浓度1%);Ⅲ组(转基因对照组):常氧培养24h;Ⅳ组(转基因缺氧1组):转基因后缺氧8h;Ⅴ组(复氧1组):常氧培养16h,缺氧8h、复氧4h;Ⅵ组(复氧2组):常氧培养16h,缺氧8h、复氧8h;Ⅶ组(复氧3组):常氧培养16h,缺氧8h、复氧12h;Ⅷ组(转基因缺氧2组):转基因后常氧培养16h,缺氧20h。ELISA法测定培养液VEGF蛋白含量;细胞免疫荧光染色及RT-PCR分别检测细胞内VEGF蛋白及VEGF165mRNA的表达。结果:95%的培养心肌细胞可见自律搏动,cTn-I染色阳性率为86%;病毒转染率约为87%。Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ组培养液中VEGF蛋白含量显着高于其它各组(P<0·01),细胞免疫荧光VEGF蛋白染色呈阳性;RT-PCR测定显示,Ⅳ、Ⅴ及Ⅷ组可见484bp目的条带。结论:rAAV-HRE9-hVEGF165可成功地转染原代培养心肌细胞,在缺氧环境下,受HRE的调控,VEGF165mRNA及VEGF165蛋白可有效表达,而在常氧状态下,目的基因的表达及蛋白合成即行中止。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2006年09期）
低氧反应元件论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
低氧反应元件论文参考文献
[1].屈野,陈晓,杨静,郭小芹,李玲.低氧反应元件荧光素酶报告载体的构建及鉴定[J].武警后勤学院学报(医学版).2015
[2].张军峰,史利利,张力,赵朝华,杨蓬勃.低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡[J].解剖学报.2015
[3].姜桢,曹永梅,曾真,顾玉春,季莹莹.低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用[J].上海交通大学学报(医学版).2015
[4].聂小维,孙立军,郝跃文,杨广笑,王全颖.构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体[J].细胞与分子免疫学杂志.2011
[5].董红燕,王强,张中明,袁延亮,张宜乾.低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF_(165)基因表达对新生血管的影响[J].徐州医学院学报.2009
[6].王小忠,彭启全,彭云恒,廖文鹏.低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用[J].中国病理生理杂志.2009
[7].苏燕,李宏伟,张静,王春玲,修瑞娟.人转化生长因子-β2启动子区低氧反应元件突变体报告基因的构建[J].现代生物医学进展.2008
[8].徐磊,张凯伦,谢艾妮,夏家红.低氧反应元件对大鼠骨骼肌成肌细胞转染表达血管内皮生长因子基因的调控作用[J].临床心血管病杂志.2007
[9].姜波,张中明,董红燕.低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF_(165)基因表达的调控[J].徐州医学院学报.2006
[10].董红燕,张中明,闫英群.缺氧、复氧条件下低氧反应元件(HRE)对心肌细胞转染hVEGF_(165)基因表达的调控作用[J].中国病理生理杂志.2006