论文摘要
茶多酚是从茶叶中提取出来的多酚类物质的总称,大量研究表明,茶多酚有抗氧化、抗肿瘤、降血脂等多种功效。目前对茶多酚的研究主要集中于其功能效方面,对其安全性研究较少。活性氧自由基在肿瘤、心血管疾病及衰老相关疾病等百余种疾病发生发展中扮演着重要的角色。因此,寻找高效、廉价、低毒的抗氧化剂及相应筛检、评价方法的研究就显得格外重要。本研究的目的是对茶多酚毒理学安全性进行评价,为茶多酚的安全合理利用提供参考;对茶多酚抗氧化作用进行评价的同时,对抗氧化剂的筛检、评价模型及指标进行评价,以筛检用于评价抗氧化作用的敏感生物标志物,标化抗氧化剂的筛检、评价模型。第一部分:茶多酚毒理学安全性评价目的:1.急性毒性实验:求出茶多酚的LD50,初步评估其急性毒性,为其亚慢性毒性实验剂量设计提供参考。2.亚慢性毒性实验:探讨茶多酚对机体产生的毒性反应和可能毒作用靶器官,确定最大物作用剂量,为探讨人群使用的安全剂量提供依据。方法:1急性毒性实验:采用Horns法,SD大鼠,180-220g,40只,雌雄各半,按体重将雌雄动物随机各分为4组,雌性动物设0.464、1.0、2.15、4.64g/kg.bw四个剂量组,雄性动物设1.0、2.15、4.64和10.0四个剂量组;受试物一次性灌胃给予,连续观察14天,观察动物的一般体征和死亡情况,计算茶多酚的LD50。2.亚慢性毒性实验:SD大鼠,60-80g,80只,雌雄各半,按性别体重随机分为4组,受试物经口灌胃给予,设0、400、600和800mg/kg.bw/day四个组,检测指标包括体重、食物利用率、血生化、血常规、PT及APTT、尿常规、脏体比和脏器的组织病理学检查。结果:1.急性毒性实验:雌性动物的LD50为1.71g/kg,雄性动物的LD50为2.33g/kg,茶多酚属低毒物质。2.亚慢性毒性实验:与对照组比较,体重、食物利用率、血常规、血生化、尿常规和组织病理学各指标均未发现有意义的改变。结论:1.急性毒性实验:茶多酚属于低毒物质。2.亚慢性毒性实验:400、600和800mg/kg.bw/day的茶多酚,连续灌胃90天,各剂量组均未发现对动物有不良影响,因此其最大无作用剂量为800mg/kg.bw。第二部分:茶多酚抗氧化作用评价一、体外实验目的:测定茶多酚的总的抗氧化能力,并验证DPPH法是否可作为抗氧化剂的快速筛检方法。方法:建立DPPH实验体系,以VC和VE为参照,TP设0.025、0.050、0.100、0.150、0.200g/L 5个剂量组,对茶多酚的抗氧化能力进行测定。结果:与VC和VE相比较,茶多酚清除DPPH自由基的能力更明显。结论:茶多酚有很强的抗氧化能力,总抗氧化能力强于VC和VE;DPPH法可作为抗氧化剂的体外快速筛检模型。二、体内实验目的:研究茶多酚体内抗氧化作用的效果、量效关系及机理,并提出评价抗氧化作用的模型及指标。方法:雄性昆明种小鼠随机分为5组,即空白对照组、溴代苯诱导氧化损伤阳性对照组（阳性对照组）和25、50、100mg/kg.bw三个茶多酚剂量组,连续灌胃30天后,除空白对照组外,各组灌胃给予溴代苯油30mg/kg.bw,20小时后,处死动物,取血和肝组织,用于各相关指标测定。结果:与空白对照组比较,阳性对照组肝组织MDA含量、NOS活性、CAT活性、肝组织细胞的彗星OLIVE尾矩值明显增加,肝组织SOD、TAOC、GSH-Px和血清GSH-Px活性明显降低;与阳性对照组比较,25、50、100mg/kg.bw三个茶多酚剂量组肝组织MDA含量、NOS活性、CAT活性、肝组织细胞的彗星OLIVE尾矩值不同程度的降低,肝组织SOD、TAOC、GSH-Px和血清GSH-Px活性不同程度的升高。结论:本研究成功建立了溴代苯诱导的小鼠急性肝组织氧化损伤模型,肝组织SOD、GSH-PX、TOAC、NOS、MDA、肝组织细胞DNA损伤和血清GSH-PX均可作为评价抗氧化作用的生物标志物,茶多酚在25mg/kg.bw/day下就有明显的抗氧化作用。