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诱导T细胞成熟及免疫抑制剂对调节性T细胞的影响

2020-11-23阅读(364)

诱导T细胞成熟及免疫抑制剂对调节性T细胞的影响

论文摘要

T细胞主要介导细胞免疫,其中调节性T细胞参与机体免疫能力的调节,因此在机体肿瘤、艾滋病和自身免疫性疾病的治疗以及器官移植排斥反应中具有十分重要的功能,对于维持机体免疫耐受和免疫应答稳态具有非常重要的作用。本实验基于T细胞发育分化研究的现状,并参考前人结果,试图寻找诱导T细胞成熟的体外简单体系;同时,研究免疫抑制剂对调节性T细胞的影响。其主要目的在于诱导有功能的效应T细胞产生,并探讨使之分化成调节性T细胞的可能性,以期联合免疫抑制剂的应用,最大限度地避免机体器官移植排斥反应,诱导移植免疫耐受。实验结果证实,在建立的S17-DLL1细胞系的参与下,可以成功地诱导CD4+CD8+胸腺细胞成熟为CD4单阳性T细胞,还可以诱导CD4+CD25-T细胞产生一定的抑制功能;另外,在免疫抑制剂CsA的作用下,小鼠体内CD4+CD25+T细胞数目明显减少,功能下降,证实了CsA在降低对移植物的排斥反应的同时使其易患自身免疫疾病的可能机制及副作用,具有特别重要的临床指导意义。通过本实验研究,有利于了解T细胞发育的关键因素,建立诱导T细胞发育成熟的简单体系,为有效的体外诱导各种功能性T细胞的细胞工程体系建立基础,该体系的成功建立将为临床细胞免疫治疗提供一新的细胞来源;证实免疫抑制剂对CD4+CD25+T细胞的影响,有助于理解其对移植免疫耐受的诱导及自身免疫性疾病发生的关系,为临床的合理用药提供基础实验依据。

论文目录

  • 前言
  • 英文缩写
  • 第一章 文献综述
  • 1 T 细胞的发育分化
  • 1.1 胸腺的形态学特征
  • 1.2 T 细胞在胸腺中的分化与发育
  • 1.3 T 细胞的种类及外周分布
  • 1.4 Notch 信号通路与淋巴细胞发育
  • 1.4.1 Notch 的发现、结构及分布
  • 1.4.2 Notch 信号通路及其作用机制
  • 1.4.3 Notch 信号通路与T 细胞发育
  • 1.4.4 Notch 信号通路与B 细胞发育
  • 1.5 T 细胞体外发育体系及研究现状
  • 2 调节性T 细胞与免疫抑制剂
  • 3 本课题研究的理论意义及实用价值
  • 第二章 材料与方法
  • 1 主要试剂及器材
  • 1.1 试剂
  • 1.2 器材
  • 1.3 主要仪器
  • 2 实验动物及分组
  • 3 实验方法
  • 3.1 质粒的转化与鉴定
  • 3.2 质粒的高纯度提取
  • 3.3 真核细胞转染
  • 3.4 RT-PCR
  • 3.5 Western blot
  • 3.6 流式细胞仪分选细胞
  • 3.7 流式细胞仪检测细胞表型
  • 3.8 免疫磁珠分选术
  • 3.9 细胞增殖的测定
  • 3.10 小鼠外周血淋巴细胞分离
  • 3.11 几种实验用细胞的培养
  • 第三章 实验结果
  • 1 建立稳定表达Delta-like 1 蛋白的517-DLL1 细胞系
  • 1.1 517 细胞中Delta-like 1 基因表达检测
  • 1.2 检测MSCV-IRES-GFP（MIG）和MIG-Delta-like 1 质粒转染效率
  • 1.3 荧光纤维镜下观察含有质粒的病毒感染517 细胞的效率
  • 1.4 517-DLL1 细胞系中Delta-like 1 表达检测
  • 2 培养体系的摸索
  • +CD8+ 胸腺细胞'>2.1 分选C57 小鼠CD4+CD8+胸腺细胞
  • +CD8+ 胸腺细胞在不同培养体系中培养3 d 后细胞表型检测'>2.2 CD4+CD8+ 胸腺细胞在不同培养体系中培养3 d 后细胞表型检测
  • 3 517-DLL1 细胞体内功能实验
  • 3.1 裸鼠体内注射517-DLL1 细胞30 d 后外周血T 细胞检测
  • 3.2 裸鼠体内注射517-DLL1 细胞80 d 后外周血T 细胞检测
  • 3.3 裸鼠体内注射517-DLL1 细胞80 d 后淋巴节与脾脏中T 细胞检测
  • 3.4 裸鼠体内注射517-DLL1 细胞80 d 后脾脏细胞混合淋巴细胞培养
  • +CD25-T 细胞培养'>4 CD4+CD25-T 细胞培养
  • +CD25+ T 细胞的影响'>5 免疫抑制剂CsA 对正常小鼠正常小鼠体内CD4+CD25+ T 细胞的影响
  • +CD25+ T 细胞的变化'>5.1 应用CsA 后外周血中CD4+CD25+ T 细胞的变化
  • +CD25+ T 的变化'>5.2 应用CsA 后脾、淋巴结和胸腺中CD4+CD25+ T 的变化
  • +CD25+ T 细胞表型变化'>5.3 应用CsA 后CD4+CD25+ T 细胞表型变化
  • 5.4 应用CsA 后mRNA 和蛋白质水平上FoxP3 的变化
  • +CD25+ T 细胞功能'>5.5 应用CsA 后检测脾脏CD4+CD25+ T 细胞功能
  • 第四章 讨论
  • 1 方法学问题
  • 1.1 真核细胞表达外源基因的方法学
  • 1.2 免疫磁珠分选方法学
  • 2 T 细胞培养体系的探索
  • 3 517-DLL1 细胞在裸鼠体内具有的功能
  • +CD25-T 细胞在培养体系中功能的变化'>4 CD4+CD25-T 细胞在培养体系中功能的变化
  • +CD25+ T 细胞的影响'>5 免疫抑制剂CsA 对正常小鼠正常小鼠体内CD4+CD25+ T 细胞的影响
  • 结论
  • 参考文献
  • 作者简历
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 致谢

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