论文摘要
前言最新研究表明，骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）是骨髓内除造血干细胞之外的非造血干细胞，可诱导分化为神经元和神经胶质细胞，因此许多动物实验利用骨髓基质细胞移植治疗脑梗死而发现促进脑梗死后神经功能恢复。Bcl-2基因具有抗凋亡作用，应用bcl-2基因治疗大鼠局灶性脑缺血可以抑制神经细胞的凋亡，减少梗死灶体积，改善大鼠神经功能。胶质细胞源性神经营养因子GDNF抑制梗死形成、减轻脑水肿、减少细胞凋亡、减少迟发性神经元损伤。本实验拟联合应用具有抗凋亡作用的bcl-2基因和骨髓基质细胞来治疗大鼠局灶性脑缺血，观察是否对缺血再灌注脑组织发挥协同或叠加保护作用，同时检测具有神经保护作用的GDNF表达是否增加，从而希望为脑梗死的治疗开辟一条新途径。实验材料与方法取健康Wistar大鼠，采用Longa改良栓线法制成大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，缺血2小时后再灌注，共分四组：空白对照组：10只，BcL-2组：10只，BMSCs组：10只，BMSCs+Bcl-2组：10只；于再灌注3小时后经颈动脉注射pLXSN—Bcl-2质粒10微克，于再灌注24小时后经尾静脉注射BMSC3×106。各组MCAO后3天（n=5），14天（n=5），处死，观察指标：应用免疫组化技术检测bcl-2蛋白和GDNF及骨髓基质细胞的表达情况。从前囟前后1毫米取材，常规固定、石蜡包埋、连续冠状切片（厚6微米），进行免疫组化染色，通过TUNEL法检测细胞凋亡情况。各组数据均以（?）±s表示，组间比较采用SPSS10.0软件进行方差分析及t检验，P＜0.05结果有统计学意义，P＜0.01结果有显著统计学意义。实验结果1．Bcl-2蛋白表达：Bcl-2组、Bcl-2+BMSCs组在缺血再灌注3天、14天的bcl-2蛋白表达较空白组、BMSCs组明显增加（P＜0.05）。2．BMSCs在脑内纹状体区分布的表达情况：BMSCs+Bcl-2组与BMSCs组比较，BMSCs数明显增多（P＜0.05）。3．神经细胞凋亡情况：BMSCs+Bcl-2组脑内细胞凋亡在各个时间点较BMSCs组、Bcl-2组、空白对照组明显减少（P＜0.05）。4．GDNF的表达情况：BMSCs+Bcl-2组GDNF表达水平在各个时间点较BMSCs组、Bcl-2组、空白对照组明显增多（p＜0.05）。结论1、联合应用骨髓基质细胞与Bcl-2抗凋亡基因治疗大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达增多、骨髓基质细胞增多、脑内细胞凋亡减少、GDNF增多。2、Bcl-2基因与骨髓基质细胞协同作用，促使神经细胞及骨髓基质细胞在脑内的凋亡进一步减少，从而避免脑缺血再灌注后脑细胞进一步损伤。