猪卵母细胞发生阶段卵巢组织学结构变化及一氧化氮合酶定位

论文摘要

哺乳动物胎儿卵母细胞发生时卵巢经历了一系列重要的组织学变化,这主要包括卵巢形成,生殖腺索的发生、变化,生殖细胞的增殖、分化和凋亡,以及原始卵泡的形成、发育和闭锁等。认识胎儿卵巢这些变化有助于加深对性别分化和卵子发生等生殖过程的理解。猪作为一种家畜在生产上和作为一种模式动物在医学研究领域得到了普遍的重视,探明猪的卵母细胞发生过程对于畜牧业生产和人类生殖医学具有特殊的意义。NO与哺乳动物的诸多生殖活动关系密切,NO参与了精子的发生,NO很可能也参与了卵母细胞的发生,研究NO在卵母细胞发生过程中的作用有助于深刻理解这一重要的生殖生理事件,可为调控动物生殖和治疗生殖疾病提供理论基础,对于人类此一过程的生殖健康维护和医学临床应用都有重要的参考价值。研究细胞内的NOS可为NO存在和作用提供依据。本实验以妊娠33 d、40 d、47 d、54 d、61 d的猪胎儿卵巢为研究对象,通过HE染色观察卵巢组织结构,通过免疫组化检测揭示NOS在卵巢上的表达与变化趋势。为后续的研究(NO对卵母细胞发生和调亡的调节、NO调节卵母细胞发生的机制)奠定基础。HE染色结果显示,①妊娠33 d胎猪的生殖腺已经分化,雄性出现睾丸白膜和睾丸索,雌性生殖腺表面上皮之下是散在的单个卵原细胞,或2～3个聚在一起,其外周一般由梭形基质细胞围绕;②妊娠40 d时胎猪卵巢髓质形成共质体样卵原细胞团,髓质中索状结构断裂,部分卵原细胞进入第一次减数分裂的前细线期或细线期:③妊娠47 d大约在皮质与髓质相接处是一些较小的细胞团。髓质中索状结构断裂成片段,形成岛状的细胞群体,和类似原始卵泡;④妊娠54 d时胎猪卵巢皮质中层索状结构外缘,出现合胞体样卵母细胞群,在与髓质相邻的皮质深层有一些原始卵泡正在形成,髓质中的岛状细胞群减少,成团块状,卵泡结构呈退化趋势;⑤妊娠61 d时胎猪卵巢皮质中层是大量合胞体样卵母细胞群,皮质深层出现了大量的原始卵泡,接近髓质的地方,有时可见到单个卵母细胞的原始卵泡。免疫组化检测结果表明,①eNOS在各个时期卵巢表面上皮细胞、卵原细胞、卵母细胞、固缩坏死的卵原细胞和卵母细胞及血管内皮细胞都有表达。妊娠33 d时阳性染色很弱,以后增强,其中妊娠47 d和妊娠61 d时阳性染色较强。各时期固缩,退化或消失的卵原细胞或卵母细胞eNOS表达很强,胞质深染;②iNOS在各个时期卵巢表面上皮细胞、卵原细胞、卵母细胞、固缩坏死的卵原细胞和卵母细胞都显示深染,且染色随着胎龄增加而逐渐增强。固缩、退化或消失的卵原细胞或卵母细胞表达呈强阳性,胞核深染;本文系统研究了从性腺分化到原始卵泡形成阶段,妊娠33～61 d胎猪卵巢的详细组织学变化,通过检测妊娠33 d、40 d、47 d、54 d和61 d猪胎儿卵巢上eNOS和iNOS的存在和分布变化,发现妊娠33～61 d胎猪卵巢的表面上皮细胞、卵原细胞、卵母细胞及血管内皮细胞都有eNOS和iNOS广泛分布,eNOS和iNOS阳性染色随着胎龄增长有增强趋势。这是首次在猪胎儿卵巢上发现有NOS存在。推测NO在卵巢生殖细胞发生发育过程中可能起着重要的调节作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 插图和附表清单
• 英文缩写中文对照
• 文献综述
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试剂其配制方法
• 1.5 胚胎获取
• 1.6 卵巢（性腺）分离
• 1.7 组织切片制作
• 1.8 HE染色
• 1.9 免疫组化染色
• 1.10 试验设计
• 2 结果与分析
• 2.1 妊娠33～61d时胎猪卵巢的组织学观察
• 2.1.1 妊娠33d时胎猪卵巢的组织学观察
• 2.1.2 妊娠40d时胎猪卵巢的组织学观察
• 2.1.3 妊娠47d时胎猪卵巢的组织学观察
• 2.1.4 妊娠54d时胎猪卵巢的组织学观察
• 2.1.5 妊娠61d时胎猪卵巢的组织学观察
• 2.2 一氧化氮合酶的免疫组化染色
• 2.2.1 内皮型一氧化氮合酶的免疫组化染色
• 2.2.2 诱导型一氧化氮合酶的免疫组化染色
• 3 讨论
• 3.1 早期猪胎儿卵巢的组织学观察
• 3.2 卵母细胞发生阶段一氧化氮合酶的免疫组化定位
• 4 结论
• 参考文献
• 附录
• 石蜡切片制作及染色过程中的几点改进
• 致谢
• 个人简介
• 在读期间发表的学术论文