左、右归丸含药血清对大鼠神经胶质细胞芳香酶活性影响的研究

论文摘要

目的:探讨左、右归丸含药血清对大鼠神经胶质细胞芳香酶活性的影响。方法:1.含药血清制备:将体重（20±2g）小鼠312只随机分组,生理盐水组（13个时段组,6只/组）、左归丸组（13个时段组,9只/组）和右归丸组（13个时段组,9只/组）。空腹16h后,分别一次性灌服等体积的生理盐水、左归丸（0.06g/10g）、右归丸（0.09g/10g）,灌胃体积均为0.3ml/10g。给药后分别于30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、10h、12h、18h、24h行股动脉取血。分离血清,取以上血清各200μL,分别加入100μL蒸馏水,振荡均匀后沸水浴10min,将变性后的血清搅拌均匀后,12000rpm离心15min,取上清待进行HPLC分析。2.血药浓度分析:采用高效液相色谱（HPLC）分析技术,比较对照品、各样品所测组分的HPLC的保留时间及峰形变化,给予定性判断。选取变化最明显的峰进行定量分析与比较,获取各时间点血药浓度,绘制药时曲线,以药物达峰前后时间点的血清作为含药血清待用。3.体外细胞培养及药物处理:按照常规方法进行C6神经胶质细胞的维持培养,待细胞生长稳定后分别转移至24孔和96孔培养板继续培养,次日分别加入各时间点含药血清以及适量E2合成底物T。24孔培养板细胞继续培养24h,提取细胞总RNA,进行芳香酶mRNA检测:96孔培养板细胞继续培养48h,取培养上清测定E2,取细胞检测细胞增殖。4.将左、右归丸按照处方组成拆方为3个复方组分,实验方法同上。结果:1.血药浓度分析:左、右归丸5h、6h、7h血清和拆方3的15min血清、拆方1、2、3的30min、1h、4h血清为含药量高血清。2.细胞上清E2含量（pg/mL）:左归丸7h组（241.99±24.14）、右归丸5h组（241.47±16.61）和右归丸6h组（379.47±115.05）明显高于（P＜0.05）含T生理盐水血清组（195.43±17.11）;拆方3的30min组（132.35±14.06）、拆方3的15min组（135.15±12.36）明显高于（P＜0.05）含T生理盐水血清组（97.16±15.79）。3.细胞增殖:与含T生理盐水血清组比较,左、右归丸组及其拆方组没有明显细胞增殖（P＞0.05）。4.芳香酶表达:左、右归丸各组芳香酶表达与含T生理盐水血清组比较无差异（P＞0.05）。结论:左、右归丸含药血清能促进C6神经胶质细胞E2合成,与细胞增殖无,关,且不影响芳香酶mRNA水平,可能通过影响芳香酶活性而实现。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 引言
• 实验研究
• 1 实验一 左、右归丸对大鼠C6神经胶质细胞芳香酶活性与表达的影响的研究
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验动物及方法
• 1.3.1 实验动物及环境
• 1.3.2 动物分组及给药
• 1.3.3 含药血清的制备
• 1.4 HPLC分析
• 1.5 含药血清培养C6神经胶质细胞
• 1.5.1 C6神经胶质细胞的维持培养
• 1.5.2 加入含药血清培养C6神经胶质细胞
• 1.6 数据测定和处理
• 2含量'>1.6.1 测定C6神经胶质细胞的E₂含量
• 1.6.2 检测左、右归丸对C6神经胶质细胞的增殖作用
• 1.6.3 C6神经胶质细胞总RNA的提取
• 1.6.4 R7-PCR测定C6神经胶质细胞P450arom表达
• 1.6.5 数据处理
• 1.7 实验结果
• 1.7.1 含左、右归丸血药浓度分析
• 1.7.2 倒置显微镜一般观察
• 2合成量的影响'>1.7.3 左归丸含药血清对C6神经胶质细胞E₂合成量的影响
• 2合成量的影响'>1.7.4 右归丸含药血清对C6神经胶质细胞E₂合成量的影响
• 1.7.5 左、右归丸含药血清培养C6神经胶质细胞48h后细胞增殖情况
• 1.7.6 左、右归丸含药血清对C6神经胶质细胞芳香酶mRNA表达水平的影响
• 2 实验二 左、右归丸拆方药物对大鼠C6神经胶质细胞芳香酶活性影响的研究
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验动物及方法
• 2.3.1 实验动物及环境
• 2.3.2 动物分组及给药
• 2.3.3 含药血清的制备
• 2.4 HPLC分析
• 2.5 含药血清培养C6神经胶质细胞
• 2.5.1 C6神经胶质细胞的培养
• 2.5.2 加入含药血清培养C6神经胶质细胞
• 2.6 数据测定和处理
• 2含量'>2.6.1 测定C6神经胶质细胞的E₂含量
• 2.6.2 检测左、右归丸拆方对C6神经胶质细胞的增殖作用
• 2.6.3 数据处理
• 2.7 实验结果
• 2.7.1 含左、右归丸拆方的血药浓度分析
• 2.7.2 倒置显微镜一般观察
• 2合成量的影响'>2.7.3 拆方1、2、3含药血清对C6神经胶质细胞E₂合成量的影响
• 2.7.4 拆方1、2、3含药血清对C6神经胶质细胞增殖的影响
• 讨论
• 2合成的中医学理论基础'>1 "肾藏精,生髓,髓通于脑"是左、右归丸促进C6神经胶质细胞E₂合成的中医学理论基础
• 1.1 左、右归丸具有补肾、填精、益髓作用
• 2合成作用,从而具有一定的神经保护作用'>1.2 左、右归丸及其拆方具有促进C6神经胶质细胞E₂合成作用,从而具有一定的神经保护作用
• 2 应用HPLC技术选择含药达峰值血清进行中药血清药理学实验较随意按固定时段取血制备含药血清更能准确有效评价药物作用
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附件1 综述 雌激素防治阿尔茨海默病的研究进展
• 附件2 综述 高效液相色谱法在中医药领域应用进展
• 附件3 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果