五倍子水提取物对体外培养人牙髓细胞生物学特性影响的实验研究

论文摘要

牙髓疾病多继发于龋病,是一个以细菌、细菌代谢产物及炎性因子等多因素参与的复杂过程。如何保护牙髓组织,促进牙髓细胞增殖、分化,发挥防御修复潜能是活髓保存治疗中研究的重点。五倍子中的主要有效成分为鞣酸,具有抗菌、抗自由基、收敛、止血、止痛、减少渗出等多种功效。已有研究证实它能抑制胶原分解,促进牙本质再矿化,抑制釉质脱矿,用鞣酸间接盖髓能促进修复性牙本质的形成。但是尚未有文献报道其对直接盖髓治疗的作用。本实验旨在观察五倍子水提取物对体外培养人牙髓细胞基本生物学特性的影响,初步探讨其作为直接盖髓材料的可能性。第一部分人牙髓细胞原代培养方法的比较本实验分别采用组织块法、酶消化法及组织块酶消化法进行人牙髓细胞原代培养。结果显示:组织块酶消化法中组织块解离、贴附和细胞游出状况均优于单纯组织块法和单纯酶消化法,成功率较高。提示:采用组织块酶消化法可提高人牙髓细胞原代培养的成功率。第二部分五倍子水提取物对人牙髓细胞增殖活性及细胞周期的影响实验一五倍子水提取物对人牙髓细胞增殖活性的影响本实验采用MTT比色分析法,观察2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml浓度的五倍子水提取物对人牙髓细胞增殖活性的影响。结果显示:五倍子水提取物浓度<20μg/ml时对人牙髓细胞的生长有促进作用,并且该促进作用具有时间依赖性,其中以10μg/ml浓度作用最为明显,而40μg/ml浓度可抑制细胞活性,抑制效应见于72h后,并随时间的延长抑制作用加强。实验二五倍子水提取物对人牙髓细胞周期的影响本实验采用流式细胞仪检测技术,观察不同浓度的五倍子水提取物对人牙髓细胞周期的影响。结果显示:五倍子水提取物作用后,DNA合成前期(G1期)细胞比例明显下降,而DNA合成期(S期)细胞比例及细胞增殖指数上升,其中以10μg/ml的五倍子水提取物作用最为明显。第三部分五倍子水提取物对人牙髓细胞碱性磷酸酶及矿化的影响实验一五倍子水提取物对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响本实验通过检测2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml浓度的五倍子水提取物作用于人牙髓细胞后对其碱性磷酸酶活性的影响。结果显示:2.5μg/ml、5μg/ml浓度的五倍子水提取物对人牙髓细胞碱性磷酸酶的活性无影响,而浓度≥10μg/ml时可抑制其活性,其中以40μg/ml浓度作用最为明显。实验二五倍子水提取物对体外连续培养人牙髓细胞矿化能力的的影响本实验采用钙质染色方法,镜下观察2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml浓度的五倍子水提取物连续作用于体外培养的人牙髓细胞,对其矿化能力的影响。结果显示:五倍子水提取物可以促进体外连续培养人牙髓细胞的矿化能力。第四部分五倍子水提取物对人牙髓细胞I型胶原合成的影响本实验采用免疫组织化学方法,观察了5μg/ml、10μg/ml浓度的五倍子水提取物对人牙髓细胞I型胶原合成的影响。结果显示:正常人牙髓细胞中可见I型胶原的表达,加入五倍子水提取物后,能明显促进人牙髓细胞I型胶原的合成。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言和文献回顾
• 正文
• 第一部分 人牙髓细胞原代培养方法的比较研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 五倍子水提取物对人牙髓细胞增殖活性及细胞周期的影响
• 实验一 五倍子水提取物对人牙髓细胞增殖活性的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验二 五倍子水提取物对人牙髓细胞周期的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三部分 五倍子水提取物对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性及矿化的影响
• 实验一 五倍子水提取物对人牙髓细胞ALP活性的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验二 五倍子水提取物对人牙髓细胞矿化的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第四部分 五倍子水提取物对人牙髓细胞I型胶原合成的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 个人简历以及硕士在读期间发表的论文
• 致谢