尤曼桉中芦丁的测定和提取技术体系初步研究

论文摘要

尤曼桉富含芦丁,1997年四川省林科院将其作为芦丁原料树种从澳大利亚引种获得成功。本研究用直接测定法、三氯化铝法、硝酸铝法测定了尤曼桉叶片、树皮、愈伤组织的芦丁含量并与高效液相色谱法的测定结果进行了比较。初步探索了热水提取法、石灰水提取法、乙醇回流法提取尤曼桉叶片芦丁的工艺条件,为尤曼桉的优良品种选育、尤曼桉的高产培育技术研究以及开发利用提供参考,初步结论如下: 本研究首次发现尤曼桉不同单株叶片乙醚脱脂后的甲醇提取液A259/A364大大高于芦丁对照品的A259/A364值1.152,存在1.71和2.324两种不同的A259/A364值单株,同一单株不同含量的叶片提取液的A259/A364基本一致。单株间芦丁含量差异很大,最大达8.5%,A259/A364为2.324单株芦丁含量明显低于A259/A364为1.71的单株,如果得到进一步的证实,A259/A364值可作为尤曼桉优良品种的筛选参考条件之一。 259nm不宜作为直接定量法和色谱分析的检测波长,364nm直接定量的芦丁含量仍然偏高。用单一的直接法、三氯化铝法、硝酸铝法定量尤曼桉芦丁均存在较大的误差,其中三氯化铝法的误差最小。但三氯化铝法测定A259/A364值为2.324的样品误差很小,硝酸铝法测定A259/A364值为1.71的样品误差较小,但在测定A259/A364值为2.324的样品误差非常大。 尤曼桉叶片芦丁的含量在4-22%之间,树皮和愈伤组织的含量在1%以下。尤曼桉的培育技术应以叶片最大产量为目的。芦丁的含量与叶片叶龄成负相关。叶片越嫩,其芦丁含量就越高。在采摘时应以枝中部生长充实的叶片为主。 在对尤曼桉叶片原料进行预处理时,随着干燥温度的升高,芦丁的含量降低;在2-5小时内,干燥时间对原料芦丁的含量影响较小,最佳原料处理条件为:60℃,4h。 热水提取尤曼桉芦丁的工艺条件为:液比1:30,时间30min,粒度100目,提取两次,热乙醇纯化;石灰水法的工艺条件为比1:10,时间10min,pH8,提取两次,石灰水重结晶纯化。乙醇回流法提取尤曼桉芦丁的工艺条件为:乙醇浓度75%,提取温度75,提取时间3h,碳酸氢纳用量10%,液比1:20,热水纯化。乙醇回流法提取的粗芦丁含有大量的不溶于水的杂质,芦丁含量为40%左右,用热水对回收溶剂后的浸膏纯化的效果不理想。三种提取方法以石灰水法较优。

论文目录

• 前言
• 1 文献综述
• 1.1 尤曼桉引种概述
• 1.1.1 尤曼桉的生物学特性
• 1.1.2 尤曼桉生态特性
• 1.1.3 尤曼桉引种情况
• 1.1.4 尤曼桉开发现状
• 1.2 芦丁含量的测定概述
• 1.2.1 芦丁的理化性质、药理作用和工业应用
• 1.2.2 芦丁含量测定的方法
• 1.2.3 定量芦丁的几种主要方法简介
• 1.3 芦丁的提取和纯化概述
• 1.3.1 芦丁的提取
• 1.3.2 粗芦丁的纯化
• 1.4 芦丁的鉴定
• 1.5 样品编号说明
• 2 材料与方法
• 2.1 仪器和试剂
• 2.2 供试材料的制备
• 2.2.1 树叶、树皮材料的制备
• 2.2.2.尤曼桉愈伤组织材料的制备
• 2.2.3 样品提取液的制备
• 2.3 尤曼桉芦丁含量的基于紫外—可见分光光度法的测定方法
• 2.3.1 芦丁标准液的配制
• 2.3.2 基于紫外—可见分光光度法的标准曲线
• 2.4 尤曼桉样品芦丁含量高效液相色谱测定
• 2.4.1 色谱条件
• 2.4.2 测试方法
• 2.5 尤曼桉叶片中芦丁的提取方法
• 2.5.1 提取原料的预处理
• 2.5.2 热水提取
• 2.5.3 石灰水法提取
• 2.5.4 乙醇回流法提取
• 2.5.5 粗芦丁的提纯和纯度鉴定
• 3 结果与分析
• 3.1 尤曼桉芦丁含量测定的结果分析
• 3.1.1 直接测定法、三氯化铝法、硝酸铝法测定的结果
• 3.1.2 液相色谱法的测定结果
• 3.1.3 四种测定方法的分析比较
• 3.1.4 预处理条件对叶片芦丁含量的影响
• 3.1.5 尤曼桉单株、器官、组织芦丁含量测定的结果分析
• 3.1.6 尤曼桉芦丁的分布差异与营林措施
• 3.2 尤曼桉芦丁提取的结果分析
• 3.2.1 热水提取法的结果分析
• 3.2.2 石灰水法提取的结果分析
• 3.2.3 乙醇回流法提取的结果分析
• 3.2.4 粗芦丁提纯实验结果
• 3.2.5 三种提取方法的效果评价
• 4 结论
• 5 进一步研究的内容
• 主要参考文献
• 附图
• 致谢