（94647部队医院）
摘要：SIRT6是Sirtuins家族中的一员，具有组蛋白去乙酰化酶及ADP-核糖基转移酶活性，有研究显示其参与了机体多项生理病理过程，但在炎症性肠病中还未见报道。本文通过DSS构建小鼠炎症性肠病模型，运用免疫组化分析实验组及对照组间小鼠结肠组织SIRT6表达差异情况，并收集68例炎症性肠病患者结肠镜活检标本，分析SIRT6表达高低与患者预后的关系。
关键词：炎症性肠病；SIRT6；预后
炎症性肠病是一种特发性肠道炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病，目前病因和发病机制尚不明确[1]。而长期反复的肠道炎症刺激是结直肠癌发病的重要因素之一，有研究显示SIRT6在结直肠癌中表达是显著降低的[2]，但在炎症性肠病阶段还未见报道。本研究拟采用免疫组化的试验方法探究在小鼠炎症性肠病模型中SIRT6的表达情况以及炎症性肠病患者中SIRT6表达高低与预后的关系。
1资料与方法
1.1一般资料选自中国人民解放军福州总院2015年1月至2018年1月间消化内科肠镜病理活检确诊为炎症性肠病患者标本68例，其中男性39例，女性29例，年龄38-73岁，平均年龄54.2岁。所有标本离体后30分钟之内储存在-80°冰箱中备用。
1.2方法
1.2.1动物模型葡聚糖硫酸钠（dextrasulfatesodium，DSS）是一种硫酸多糖体，由蔗糖合成。实验组由纯净水配置3%DSS溶液饲喂6-8周龄的雄性C57BL/6J小鼠20只，连续5天，然后改用普通饮用水10天，称为一个循环，连续3个循环，对照组20只小鼠持续给予普通饮用水，并在实验组小鼠第三个循环结束后一起处死。DSS为美国MP公司生产，分子量为36000-50000。
1.2.2免疫组化采用SP法，运用柠檬酸-磷酸氢二钠进行抗原修复，以及Abcam公司的DoubleStainIHC试剂盒（ab183285）进行抗原封闭和二抗孵育、DAB显色。SIRT6抗体选用Abcam公司（ab62739），并用PBS按照1：200比例进行稀释。
1.2.3判断标准SIRT6染色阳性信号定位于细胞核，染色强度评分标准：不着色0分，黄色1分，棕黄色2分；黄褐色3分。阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞数<10%者0分；10%～25%者1分；26%～50%者2分；51%～75%者3分；＞75%者4分。两种评分乘积0～6分为弱表达；6～12分为强表达。
1.3统计处理
2结果
2.1SIRT6在小鼠模型中的实验组与对照组的表达情况免疫组化结果显示，SIRT6在小鼠结肠组织均显色在细胞核上，呈黄色粗大颗粒。根据上述免疫组化评分标准，实验组小鼠SIRT6弱表达16只，强表达4只；对照组小鼠弱表达8只，强表达12只；运用T检验，双侧检验，α=0.05，两组之间SIRT6表达差异具有统计学意义(p＜0.05)，可认为实验组SIRT6表达较对照组显著降低。
2.2SIRT6在炎症性肠病患者中表达高低与预后的关系通过将收集到的68例炎症性肠病患者的肠镜病理活检标本做成石蜡组织切片，并运用免疫组化分析患者病灶组织中SIRT6表达的情况。经分析SIRT6弱表达患者43例，强表达患者25例，两组患者之间年龄、性别无统计学差异（P＞0.05），但SIRT6弱表达的患者较强表达患者病程长，炎症浸润深且范围广，药物治疗后复发常见（P＜0.05）。
3讨论
SIRT6属于Sirt2蛋白家族中的一员，目前已知其拥有NAD+依赖的组蛋白去乙酰化和单ADP核糖基转移酶两种功能。SIRT6通过这两种功能在调控DNA修复、端粒维护、葡萄糖与脂质的代谢、炎症反应以及癌症的发生与发展等方面发挥重要作用[3]。有研究显示SIRT6可通过TNF-α下游途径发挥抗炎作用。TNF-α有激活促炎细胞因子NF-κB的作用，而SIRT6则被招募到NF-κB的核心亚基Rela，通过使Rela亚基调控的靶基因启动子部位的H3K9去乙酰化沉默NF-κB靶基因[4]。
炎症性肠病是一种病因及发病机制不明的慢性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎和克罗恩病两种。由于临床上没有太好的办法治疗炎症性肠病，导致患者病情反复迁延，增加了患结直肠癌的概率。本研究通过DSS诱导小鼠炎性肠癌模型并收集患者肠镜活检标本进行免疫组化分析，得出炎症性肠病过程中SIRT6表达降低，且SIRT6低表达的患者临床预后较高表达的患者差，说明SIRT6在炎症性肠病进程中发挥了抗炎作用，因此SIRT6有望成为预测炎症性肠病患者预后以及治疗的靶点。
参考文献
[1]Kaser，A.，S.Zeissig，andR.S.Blumberg，Inflammatoryboweldisease.AnnuRevImmunol，2010.28：p.573-621.
[2]Tian，J.andL.Yuan，Sirtuin6inhibitscoloncancerprogressionbymodulatingPTEN/AKTsignaling.BiomedPharmacother，2018.106：p.109-116.
[3]Khan，R.I.，S.S.R.Nirzhor，andR.Akter，AReviewoftheRecentAdvancesMadewithSIRT6anditsImplicationsonAgingRelatedProcesses，MajorHumanDiseases，andPossibleTherapeuticTargets.Biomolecules，2018.8(3).
[4]Li，P.，etal.，SIRT6ActsasaNegativeRegulatorinDengueVirus-InducedInflammatoryResponsebyTargetingtheDNABindingDomainofNF-kappaBp65.FrontCellInfectMicrobiol，2018.8：p.113.