泡球蚴Em18抗原基因的克隆、原核表达及其免疫诊断价值的研究

论文摘要

目的:克隆泡球蚴18（Em18）抗原基因,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,对其用于两型包虫病的免疫诊断特性进行研究。方法:DNAman软件设计引物。分别经PCR筛选,从已构建的新疆株泡球蚴cDNA文库中克隆出Em18抗原基因;及Trizol试剂提取泡球蚴原头节总RNA,RT-PCR反转录克隆出Em18抗原基因,并构建pMD18-T/Em18质粒,测序确定序列。构建pET41a-Em18原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。IPTG诱导表达rEm18-GST重组蛋白和GST重组蛋白,谷光甘肽-Sepharose 4B亲合层析柱纯化,SDS-PAGE法和Western Blot法分析鉴定。ELISA法及Western Blot法检测523份血清（其中59份AE病人血清,240份CE病人血清）,确定Em18重组蛋白对于两型包虫病的免疫诊断特性。结果:测序显示Em18基因长度为486bp,编码161个氨基酸,为一新序列,被GenBank收录（AY513691）。成功构建了pET41a-Em18原核表达质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明rEm18-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量（KDa）为50处有表达条带;Western Blot分析显示rEm18-GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。523份血清经rEm18-GST重组蛋白检测,ELISA法显示其敏感性为91.52%,特异性为94.61%;Western Blot法检测显示敏感性为93.22%,特异性为94.82%。结论:成功克隆Em18抗原基因,表达的rEm18-GST重组蛋白对两型包虫病具有较高的免疫鉴别特性和免疫诊断价值,有望

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 实验一：新疆泡球蚴Em18抗原基因的克隆及序列分析
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二：Em18重组蛋白的诱导、表达、纯化及其抗原性的初步检测
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验三：Em18重组抗原血清学诊断价值的评价
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 缩略词表
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 个人简历