论文摘要
目的：纤维胶凝蛋白（Ficolin）是一种类似于甘露聚糖结合凝集素结构的人血清补体凝集素（MBL）,主要由肝脏产生,并分泌到血浆中。可识别病原微生物表面的病原相关模式分子（PAMPs）,通过激活补体及调理吞噬细胞的吞噬作用在天然免疫中发挥重要作用。丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）和乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）是导致全世界慢性肝脏疾病的主要原因,可引起肝腹水,肝硬化,肝癌等严重后果,其传播方式主要是通过输血传播。由于病毒在机体内持续复制,机体产生适应性免疫应答和固有免疫应答,其产生的抗体、抗原抗体复合物及补体复合物等物质,既可参与抗病毒的作用,也可对肝细胞的损伤产生一定的损害。本室前期研究发现Ficolin-2蛋白可与HCV包膜糖蛋白E1、E2发生结合从而发挥抗感染作用,Ficolin-2蛋白在急性丙型肝炎患者血清中高于正常人和肝硬化患者血清中的表达；本实验室和其它实验室研究也显示,急性乙型肝炎患者与健康对照组相比有较高的血清Ficolin-2蛋白浓度,然而,Ficolin-2蛋白和慢性丙型肝炎（CHC）和慢性乙型肝炎（CHB）之间的关系仍不清楚。本研究的目的是研究慢性丙型肝炎患者Ficolin-2蛋白在其治疗病程中的变化规律以及慢性乙型肝炎患者Ficolin-2蛋白在其病程中的变化规律,并为探讨Ficolin-2蛋白在病毒性肝炎病程中所发挥的免疫机制提供一些新的研究思路。内容与方法：各收集近50份慢性丙型肝炎患者和慢性乙型肝炎患者血清及随访部分患者,收集患者各个病程不同时段的血清样本。包括49例未接受治疗的慢性丙型肝炎感染者,其中有24例丙型肝炎患者的丙氨酸转氨酶（ALT）水平增高（>40IU/L）,25例丙氨酸转氨酶（ALT）正常（≤40IU/L）的丙型肝炎携带者,另外有28例丙型肝炎患者接受了两周抗病毒治疗,其中有16例患者接受一个月或更长时间的抗病毒治疗,42名健康献血者的血清作为对照；31例如慢性乙型肝炎患者表现为丙氨酸转氨酶（ALT）增高（大于40IU/L）及确诊感染乙肝病毒（HBV-DNA拷贝数>500cps/ml）和HBsAg阳性等临床表现,其中有20例患者还伴随HBeAg阳性,所有31例慢性乙型肝炎患者均接受12个月的随访观察时间,在随访初期,第3个月,第6个月,第12个月收集患者血清,共收集4次；另外收集17例慢性乙型肝炎携带者（ALT<40IU/L, HBV-DNA拷贝数>500cps/ml）及57例健康献血者的血清作为对照。采用夹心ELISA法检测血清中Ficolin-2蛋白浓度。pH9.6的包被液稀释anti-Ficolin-2,包被96孔板,室温（RT）孵育一个小时,5%牛血清白蛋白（BSA）4度封闭过夜,0.1%Tween-20在磷酸盐缓冲溶液（PBS）洗涤3次,加100微升血清样本,不同稀释浓度的HCVcc及不同稀释浓度的Ficolin-2蛋白,37度孵育2小时,0.1%的PBST洗板3次,加100微升鼠抗人的Ficolin-2单抗GN5（1：1000稀释）,37度孵育2小时,0.1%的PBST洗板3次,加100微升HRP-羊抗鼠IgG（1：1000稀释）,37度孵育1小时,0.1%的PBST洗板5次,TMB显色,OD450读数,根据提取的Ficolin-2蛋白绘制标准曲线,计算血清样本中Ficolin-2蛋白浓度,并根据患者病程中的不同时间段的感染病毒载量,ALT值,HBeAg和HBeAb等相关临床资料进行统计学分析。结果：1.慢性丙型肝炎疾病初期其患者（ALT>40IU/L）的血清中Ficolin-2蛋白浓度明显高于慢性丙型肝炎携带者（ALT<40IU/L）和健康对照组的血清中Ficolin-2蛋白浓度,而慢性丙型肝炎携带者与正常人的Ficolin-2蛋白水平则没有差异。2.慢性丙型肝炎疾病初期其患者Ficolin-2蛋白浓度ALT表现为正相关性；轻中度患者（HCV-RNA拷贝数<107cps/ml）的Ficolin-2蛋白浓度与HCV-RNA水平呈正相关性,而重度感染患者（HCV-RNA拷贝数>107cps/ml）的Ficolin-2蛋白浓度与HCV-RNA水平没有相关性。3.慢性丙型肝炎患者血清中Ficolin-2蛋白浓度在治疗前后有显著性差异,治疗前的Ficolin-2蛋白浓度高于治疗后的Ficolin-2蛋白浓度,治疗后,患者的血清Ficolin-2蛋白浓度降低,并随ALT及HCV-RNA呈现正相关变化。4.治疗后发生快速病毒反应的慢性丙型肝炎患者的血清（RVR） Ficolin-2蛋白浓度明显下降,而没有发生快速病毒反应的患者的血清（non-RVR） Ficolin-2蛋白浓度没有明显下降（P>0.05）。5.在随访初期Ficolin-2蛋白浓度在慢性乙型肝炎患者（ALT>40IU/L）血清中明显高于慢性乙型肝炎携带者（ALT<40IU/L）和健康对照组血清,而慢性乙型肝炎携带者与正常人的Ficolin-2蛋白浓度则没有差异。6.31例慢性乙型肝炎患者在随访初期和随访末期Ficolin-2蛋白浓度有显著性差异,Ficolin-2蛋白浓度在随访初期高于随访末期；随访初期,慢性乙型肝炎患者的Ficon-2浓度与患者ALT、HBV-DNA没有相关性,HBeAg阳性和HBeAg阴性患者的血清Ficon-2浓度没有差异。7.随访初期拥有高浓度Ficolin-2蛋白（>4.8微克/毫升）的慢性乙型肝炎患者12个月后均伴随较显著的HBV-DNA下降,提示可能会有较好预后。随访末期表现有HBV-DNA及ALT均下降等较好预后趋势的患者也伴随着Ficolin-2蛋白浓度的下降。8.随访期间,慢性乙型肝炎患者的Ficolin-2蛋白、HBV-DNA、ALT均有下降,随访末期显示有较明显的ALT降低,HBV-DNA下降,HBeAg血清学转换等较好预后趋势的慢性乙型肝炎患者也伴随着Ficolin-2蛋白浓度的下降,而没有表现明显的ALT降低,HBV-DNA下降及HBeAg血清学转换等较好预后趋势的患者也没有明显Ficolin-2蛋白浓度的下降的表现9.体内拥有较高浓度的Ficolin-2蛋白的慢性乙型肝炎患者容易发生HBeAg血清学转换。结论：1.慢性丙型肝炎疾病初期高水平的Ficolin-2蛋白浓度与肝脏炎症和快速病毒应答密切相关。2.在慢性乙型肝炎随访初期中表现较高水平的Ficolin-2蛋白浓度的患者可发生明显的HBV-DNA的下降与HBeAg的血清学转换。