人参锈腐病颉颃放线菌的筛选及鉴定

论文摘要

本研究于2006年至2007年,从吉林省的通化市、靖宇县和长白县三地采集人参根际土样126份,从中分离出真菌39株、细菌68株、放线菌232株,对人参根际的放线菌、真菌、细菌数量的变化进行了研究。研究结果表明,随着栽参年限的增加,人参根际土壤中微生物数量呈下降的趋势,其中新林土中的微生物数量最多,老参地中最少;新林土到1年与5年到老参地这两个时间段根际土壤中微生物数量降低幅度较大。随着深度的增加,土壤微生物数量呈下降的趋势,其中0～5cm与5～10cm土层间的降低幅度要高于5～10cm与10～15cm土层间;不同年限同一土层的土壤中,微生物数量不完全遵循下降的趋势。对分离出的39株真菌、68株细菌、232株放线菌与人参锈腐病菌进行了颉颃试验,结果表明,39株真菌对人参锈腐病菌完全没有颉颃作用;68株细菌中仅有3株有颉颃作用,但是作用不大且效果很不稳定;232株放线菌中筛选出颉颃效果较好的有9株,据此对这9株放线菌进行再次筛选。对这9株放线菌进行液体培养,取其发酵液对锈腐病菌进行颉颃试验,计算抑菌率,从中选出颉颃效果最好的菌株MS32,颉颃带宽度为11mm,抑菌率为76.45%。对菌株MS32的液体培养条件进行了初步研究,主要研究培养基、温度、pH和培养时间对其发酵液抑菌效果的影响;并在此基础上对培养条件进行4因素3水平正交试验,最终确定了MS32的最适液体培养条件:培养基为玉米粉大豆粉培养基、温度为29℃,pH8,培养时间为120h。对该株放线菌进行了形态学观察和部分生理生化反应的测定,并对16S rDNA序列进行了测定。形态学观察得出此株放线菌具有典型的链霉菌属的特征,证实其为链霉菌属。生理生化反应测定结果为:菌株MS32使明胶液化,不产生H2S,牛奶不凝固胨化,淀粉水解,纤维素水解;可以利用D-葡萄糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、肌醇作为碳源。对MS32的16S rDNA序列测定,其核苷酸序列长度为1250bp,将所测序列与从GenBank数据库中的同源性较高的32个链霉菌属放线菌序列进行比较,在系统进化树上菌株MS32与1个已知种Streptomyces naraensis（AB184691）部分16S rDNA序列98%相似,与另外2个菌株的的同源性也为98%,说明这4个菌株可能属于同一个种。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 人参根际微生物数量变化研究
• 1.2 人参锈腐病的研究进展
• 1.3 防治
• 1.4 研究意义
• 第二章 人参根际微生物种群数量变化研究
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果与分析
• 2.3 小结
• 第三章 人参锈腐病颉颃放线菌菌株的筛选及高效颉颃菌株MS32液体培养条件的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果与分析
• 3.3 小结
• 第四章 颉颃菌株MS32的鉴定
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 培养特征
• 4.2.2 部分生理生化反应试验
• 4.2.3 碳源利用试验
• 4.2.4 分子鉴定结果
• 第五章 结论与讨论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介